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文檔簡介
1、研究目的:克隆表達分支桿菌噬菌體D29裂解酶gp10,觀察該重組裂解酶對膿腫分支桿菌等多重耐藥菌的抑菌作用,為開發(fā)治療多重耐藥菌感染的藥物打下基礎(chǔ)。
方法:以噬菌體D29基因組DNA為模板,用PCR擴增gp10基因片段,克隆入PET32a質(zhì)粒,構(gòu)建重組原核表達載體PET32a-gp10,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21,IPTG誘導表達。SDS-PAGE分析表達蛋白的相對分子質(zhì)量和表達形式,離子交換層析純化重組蛋白后,用杯碟法測定其
2、抗菌活性。
結(jié)果:PCR擴增獲得長1454bp的gp10基因片段,經(jīng)PCR、雙酶切及測序證明重組質(zhì)粒PET32a-gp10構(gòu)建正確。SDS-PAGE顯示表達蛋白相對分子量約為54.8KD,與預期相符;目的蛋白在表達上清,碎菌上清和碎菌沉淀中均可見,純化后均一性可達90%。杯碟法測定重組蛋白對膿腫分支桿菌出現(xiàn)抑菌環(huán),對金黃色葡萄球菌沒有抑菌環(huán)。
結(jié)論:重組分支桿菌噬菌體D29裂解酶gp10對膿腫分支桿菌有明顯的
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