乳真蛋白和尿素與銨態(tài)氮檢測(cè)方法研究.pdf

1、目前，人們對(duì)乳制品的需求量越來越大，而作為乳制品基本來源的原料乳供應(yīng)卻呈明顯短缺態(tài)勢(shì)。在此情況下，一些不法者為了自身利益而非法向原料乳中加入其他外源物質(zhì)，獲取不正當(dāng)利益。當(dāng)前牛奶的摻假主要針對(duì)乳蛋白成分，使用的摻假物質(zhì)主要包括縮二脲、三聚氰胺等化工原料、尿素、硫酸銨等農(nóng)用化肥。引起這種摻假現(xiàn)象蔓延的原因主要在于現(xiàn)有蛋白檢測(cè)技術(shù)的缺陷以及摻假物質(zhì)檢測(cè)方法的局限性。
　　 本研究針對(duì)目前乳品業(yè)發(fā)展中存在的上述狀況，分別對(duì)乳真蛋白(T

2、P)和尿素氮與銨態(tài)氮檢測(cè)方法及其檢測(cè)體系進(jìn)行了研究。其中乳TP的檢測(cè)通過建立微量化Lowry反應(yīng)體系進(jìn)行，尿素氮和銨態(tài)氮的檢測(cè)通過建立酶解-Berthelot反應(yīng)體系進(jìn)行。研究中對(duì)每種反應(yīng)體系建立過程中所涉及到的主要問題進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)摸索，并依據(jù)方法學(xué)要求，對(duì)建立的每種反應(yīng)體系從各主要方面進(jìn)行了詳細(xì)評(píng)價(jià)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種反應(yīng)體系分別可以準(zhǔn)確、高效、靈敏的對(duì)乳TP和尿素氮與銨態(tài)氮總量進(jìn)行測(cè)定，酶解-Berthelot體系還能

3、分別定量尿素氮與銨態(tài)氮濃度。各檢測(cè)體系的主要特點(diǎn)如下：
　　 微量化Lowry反應(yīng)體系在自動(dòng)分析應(yīng)用中，其TP測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性高，與凱氏定氮法(不添加無機(jī)含氮物質(zhì)、有機(jī)非蛋白質(zhì)含氮物質(zhì)時(shí))間無顯著性差異；反應(yīng)體系中樣品液蛋白濃度為10～100μg/mL線性良好，最低檢測(cè)濃度為5μg；可以將乳樣做500倍稀釋后直接測(cè)定，乳蛋白含量在0.5～5.0g/100g時(shí)可準(zhǔn)確定量。方法在不同樣品、不同測(cè)定時(shí)間內(nèi)的重復(fù)性良好；乳中可能存在或人為

4、添加的疊氮化鈉、碳酸氫鈉、硫酸鈉、尿素、三聚氰胺、硫酸銨、鹽酸羥胺、硫脲、亞硝酸鹽、蔗糖和氯化鈉等不會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生干擾，重鉻酸鉀只有在濃度超過10mg/mL時(shí)，才對(duì)反應(yīng)產(chǎn)生影響，其能使反應(yīng)結(jié)果升高。
　　 酶解-Berthelot法測(cè)定乳中尿素氮與銨態(tài)氮，在0.5～400mg N/100g范圍內(nèi)可準(zhǔn)確定量(即尿素1.073mg/100g～0.858g/100g或硫酸銨2.36mg/100g～1.888g/100g，相當(dāng)于3.1

5、25 mg/100g～2.5g/100g蛋白質(zhì)的含氮量)，添加回收率高(＞96％)、結(jié)果準(zhǔn)確，能夠準(zhǔn)確定量尿素氮與銨態(tài)氮總量及分別濃度，既能對(duì)人為添加的尿素、硫酸銨等進(jìn)行測(cè)定，也可以檢測(cè)牛奶中含有的內(nèi)源尿素氮(MUN)。反應(yīng)中牛奶樣品的前處理采用TCA沉淀法，該過程在脲酶處理之進(jìn)行。方法在不同樣品、不同測(cè)定時(shí)間、不同操作人員間的重復(fù)性好，乳中可能同時(shí)存在的疊氮化鈉、碳酸氫鈉、硫酸鈉、蔗糖、葡萄糖和氯化鈉等不會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生干擾，超過一定