致農(nóng)民肺嗜熱吸水鏈霉菌cDNA文庫的構(gòu)建及體外表達.pdf

1、目的:構(gòu)建致農(nóng)民肺嗜熱吸水鏈霉菌cDNA文庫并進行EST測序，通過生物信息學軟件分析EST序列同源性及生物學功能，篩選重組陽性基因克隆進行體外克隆并誘導表達。
　　方法:利用SMART方法構(gòu)建致農(nóng)民肺嗜熱吸水鏈霉菌的cDNA文庫，將平板內(nèi)克隆進行編號，取前1020個克隆提取質(zhì)粒，進行EST測序。分析EST測序結(jié)果并預測基因功能，從中篩選有關(guān)目的基因，將這些目的基因亞克隆入pET-28a載體，將重組子轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL2(DE3)，用

2、IPTG誘導相關(guān)蛋白的體外表達。
　　結(jié)果:成功構(gòu)建了較高質(zhì)量的嗜熱吸水鏈霉菌cDNA文庫，得到有義序列978個，獲得單一基因347個，其中2段基因分別與胸膜肺炎放線菌外膜蛋白(omlA)，轉(zhuǎn)鐵蛋白B(TbpB)的同源性為51％和42％，其開放閱讀框(ORF)長度分別為1554bp和726bp，分別編碼571和241個氨基酸，將2段基因亞克隆入原核表達載體中，IPTG誘導表達產(chǎn)物的相對分子質(zhì)量分別為63kDa和30kDa。