傷寒沙門菌質(zhì)粒pR-,ST98-與巨噬細胞凋亡關(guān)系的研究.pdf

1、目的：研究傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒pRST98與小鼠巨噬細胞J774A．1凋亡之間的關(guān)系，為進一步明確pRST98在沙門菌致病中的作用機制提供理論和實驗依據(jù)。 方法：將傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒pR-ST98導入有成熟動物模型和遺傳背景明確的鼠傷寒沙門菌低毒株RIA中，形成接合子pRST98/RIA，并用攜帶一分子量為100kb毒力質(zhì)粒的鼠傷寒沙門菌標準毒株SR-11作陽性對照，RIA作陰性對照。為確定細菌與J774A．1共培養(yǎng)時阿米卡星(A

2、MK)對胞外受試菌的抑菌、殺菌效果以及感染的最佳比例，首先進行了AMK對SR-11、pRST98／RIA和RIA的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)以及細菌與細胞感染復數(shù)(MOI)的測定，用以確定MOI和最佳觀察時間。將以上3株菌在體外分別與小鼠巨噬細胞J774A．I共培養(yǎng)，于0h，2h，4h，6h，12h和24h用JC-1染色法和流式細胞術(shù)檢測pRST98對J774A．1線粒體膜電位的影響；Annexin V-FITC試劑

3、盒和TUNEL法檢測J774A．I的凋亡情況；用MTT法檢測細菌對細胞生長的抑制率，臺盼藍染色法和系列稀釋法分別用于檢測活細胞數(shù)和胞內(nèi)活菌數(shù)。 結(jié)果：AMK對pRST98／RIA和RIA的MIC相同，均為10μg/ml，對SR-11的MIC為5μg/ml，對3株菌的MBC均為80μg／ml。3株菌在含100μg/ml的AMK培養(yǎng)基中2h后可被有效殺滅。細菌和細胞共培養(yǎng)3h，MOI為100：1時作用明顯。細菌與細胞作用2h后起，S

4、R-11組、pRST98/RIA組和RIA組J774A．1線粒體膜電位下降的百分率依次降低，隨著感染時間延長J774A.1通過線粒體途徑而導致的細胞凋亡率呈上升趨勢；Annexin V-FITC試劑盒檢測各感染組J774A.1的凋亡率表現(xiàn)為SR-11組>pRST98/RIA組>RIA組(P<0.05)，TUNEL法檢測J774A．1的凋亡情況表現(xiàn)為SR-11組最高，pRST98／RIA組高于RIA組；MTT法檢測細菌對細胞生長的抑制率表