歐李交替氧化酶基因(AOX2)的克隆及功能初步研究.pdf

1、干旱脅迫是最常見(jiàn)的自然災(zāi)害，能導(dǎo)致作物大量減產(chǎn)、土地荒漠化等一系列問(wèn)題。培育新型耐旱植物是解決這些問(wèn)題的有效途徑。歐李(Cerasus humilis(Bge.)Sok.）具有非常強(qiáng)的耐旱性，同時(shí)具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，這使得歐李成為旱地種植的熱門樹(shù)種。干旱脅迫下，植物通過(guò)ABA介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)，來(lái)應(yīng)對(duì)不良環(huán)境，其中，交替氧化酶(AOX)發(fā)揮重要作用。為了探究脅迫與歐李間的關(guān)系，我們分析了干旱和水楊酸處理后AOX和UCP兩家族的表達(dá)

2、情況。然后，運(yùn)用分子生物學(xué)的方法成功構(gòu)建了兩原核表達(dá)載體和兩植物表達(dá)載體。主要結(jié)果如下：
　　1、干旱脅迫下，AOX家族和UCP家族成員的表達(dá)量整體上調(diào)，只有AOX1a和AOX2的變化不明顯，其中AOX2的表達(dá)量在整個(gè)處理過(guò)程中都處于最高水平;相反，水楊酸處理后，兩家族成員的表達(dá)普遍下調(diào)，僅UCP2例外，AOX2的表達(dá)量仍然處于最高水平。故推測(cè)AOX2基因是歐李響應(yīng)脅迫的關(guān)鍵基因。
　　2、歐李A(yù)OX2基因全長(zhǎng)1559bp，

3、5'端非編碼區(qū)共185bp，3'端非編碼區(qū)共345bp，開(kāi)放閱讀框1029bp，編碼342個(gè)氨基酸。歐李A(yù)OX2蛋白由多個(gè)α螺旋和多個(gè)無(wú)規(guī)卷曲相互交替構(gòu)成，包含兩個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，保守區(qū)域多集中在C端，與擬南芥的AOX2蛋白的同源性為66.96％，高出22個(gè)物種的平均水平1.98％。
　　3、pGEX-4T-3-A在BL21(DE3)、DH5α中不穩(wěn)定表達(dá)，而在Rosetta(DE3)菌株中穩(wěn)定表達(dá)，可溶性融合蛋白的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于沉淀中的