缺氧環(huán)境下BMSCs促進VECs增殖和血管形成.pdf

1、目的：
　　 觀察成人骨髓間充質(zhì)干細胞在體外缺氧環(huán)境下對人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖和血管形成能力的影響并探討其可能機制，為干細胞更好的應用于臨床上缺血缺氧性疾病的治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 收集成人骨髓血，密度梯度離心法收集分離BMSCs并進行體外擴增培養(yǎng)，傳至第4代用于實驗；流式細胞技術(shù)鑒定BMSCs表面標志物。
　　 收集BMSCs常氧環(huán)境(氧濃度為21％)下培養(yǎng)24h和缺氧環(huán)境下(含1％O2，

2、5％CO2和94％N2的混合氣體環(huán)境)培養(yǎng)24h后的細胞上清液即條件培養(yǎng)基。HUVECs傳代培養(yǎng)后分成3組進行實驗：對照組、BMSCsCMN-HUVECs組和BMSCsCMH-HUVECs組，各實驗組細胞于缺氧環(huán)境下用含不同條件培養(yǎng)基的培養(yǎng)液培養(yǎng)，體外血管形成實驗分析3組HUVECs在Matrigel上管腔樣結(jié)構(gòu)形成情況，并進行量化比較；MTT檢N3組HUVECs增殖能力。
　　 BMSCs在缺氧環(huán)境下培養(yǎng)0h、12h、24h和

3、48h后，RT-PCR檢測細胞內(nèi)SDF-1和VEGF的基因表達情況，0h為對照組，12h、24h和48h為實驗組；ELISA法檢測細胞上清液中SDF-1和VEGF的蛋白含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.人BMSCs傳至第4代呈旋渦狀長梭形即纖維母細胞樣生長；對數(shù)生長期的HUVECs多為多角形或短梭形，呈”鋪路石”樣排列生長
　　 2.人BMSCs陽性表達CD29、CD44和CD90，而陰性表達CD34、CD45和C

4、D106
　　 3.BMSCsCMH-HUVECs組管腔樣結(jié)構(gòu)多于對照組和BMSCsCMN-HUVECs組。[14±2.3與3±0.59；14±2.3與5±1.1，P<0.05]
　　 4.不同缺氧時間點(12h，24h和48h)BMSCsCMH-HUVECs細胞增殖能力均顯著高于對照組和BMSCsCMN-HUVECs組。[0.54±0.053與0.33±0.041，0.68±0.091與0.42±0.048，0.72±

5、0.106與0.49±0.074；0.54±0.053與0.31±0.041，0.68±0.091與0.43±0.071，0.72+0.106與0.51±0.086，P<0.05]
　　 5.不同缺氧時間點(12h，24h和48h)BMSCs的SDF-1和VEGF基因表達水平均顯著高于對照組。[VEGF：0.718±0.048 vs0.532±0.081，0.922±0.104 vs0.532±0.081，0.843±0.092

6、 vs0.532±0.081；SDF-1:0.569±0.091 vs0.361±0.035，0.701±0.046 vs0.361±0.035，0.695±0.074 vs0.361±0.035，P<0.05]
　　 6.BMSCsCMH中SDF-1和VEGF蛋白含量均明顯高于BMSCsCMN。[SDF-1：(4.52±0.44)ng/106cells與(1.37±0.09)ng/106cells；VEGF：(7.94±0.8

7、9)ng/106cell與(2.75±0.23)ng/106 cells，P<0.05]。
　　 結(jié)論：
　　 1.缺氧環(huán)境下收集的條件培養(yǎng)基即BMSCsCMH顯著提高HUVECs增殖和在Matrigel上管腔樣結(jié)構(gòu)形成能力；
　　 2.缺氧顯著上調(diào)BMSCs的SDF-1和VEGF基因表達，并促進二者大量分泌至細胞上清液中發(fā)揮作用；
　　 3.成人BMSCs在缺氧環(huán)境下通過旁分泌SDF-1和VEGF提高血