長期培養(yǎng)的CIK細(xì)胞hTERT基因表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　 初步探討長期培養(yǎng)的CIK細(xì)胞hTERT基因表達(dá)水平的變化,進(jìn)一步評(píng)價(jià)CIK細(xì)胞治療的安全性。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:
　　 抽取3名健康人外周靜脈血進(jìn)行CIK細(xì)胞培養(yǎng),每周臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測培養(yǎng)第0、2、7、21及42天的CIK細(xì)胞hTERTmRNA基因的表達(dá)水平,流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)第0、7、14、28、49及56天的CIK細(xì)胞周期的改變并檢測凋亡,MTT法測定培養(yǎng)第14、3

2、0天的CIK細(xì)胞對肺腺癌LTPEP-a-2細(xì)胞系的細(xì)胞毒活性。
　　 結(jié)果:
　　 CIK細(xì)胞在體外培養(yǎng)第28天至第35天細(xì)胞增殖達(dá)高峰,分別由第0天的5.6×106、5.6×106、8.0×106增加至第28天的37.5×106,71×106和第35天的127.6×10°,與第0天相比分別擴(kuò)增6.70、10.76和15.95倍,此后存活細(xì)胞逐漸減少,最終約60天左右細(xì)胞全部死亡,與流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果一致;CIK

3、細(xì)胞hTERT表達(dá)水平在培養(yǎng)48小時(shí)最高,hTERT的CT值在第0天分別為30.57、32.27、30.44,培養(yǎng)至第2天的CT值分別為29.91、31.54、27.86,采用△△CT方法進(jìn)行定量,使用管家基因β-actin來比較hTERT的相對含量,可見CIK細(xì)胞hTERT的表達(dá)水平較第0天增加約2.84±1.27倍,隨后隨培養(yǎng)時(shí)間延長表達(dá)水平下降,在培養(yǎng)1周時(shí)降至培養(yǎng)初始水平,并在此后的培養(yǎng)過程中維持低水平表達(dá):在CIK培養(yǎng)1周時(shí)處