葛花及葛根提取物對(duì)乙醇在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程的影響及機(jī)制研究.pdf

1、酒及酒精性飲料作為一種常用的飲品，具有悠久的歷史。適量飲酒，能促進(jìn)血液循環(huán)，具有養(yǎng)生保健的功效。但長(zhǎng)期過(guò)量攝取易誘發(fā)酒精性脂肪性肝炎、肝硬化，還可影響多種藥物在體內(nèi)的代謝。在中國(guó)飲食文化中，人們有時(shí)不得不被動(dòng)攝取過(guò)量酒精。當(dāng)血中乙醇濃度超過(guò)800mg/L即為酒精中毒，俗稱醉酒，會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生先興奮后抑制作用，重度中毒可使呼吸、心跳抑制，造成死亡。 葛花為豆科植物野葛或甘葛藤的花，中醫(yī)單純的解酒中藥僅有幾味，葛花為其中之一，

2、其主要成分為異黃酮類化合物及三萜皂甙。葛根含有異黃酮類化合物以及少量的黃酮類物質(zhì)，黃豆苷元、黃豆苷、葛根素是主要活性成分。在中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，葛花和葛根用于解除酒后宿醉及飲酒前服用防醉，已有大量藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)證實(shí)，但目前尚缺乏藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)的支持。 因此，本項(xiàng)目的研究目的是：從乙醇在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程、酶活性方面研究葛花及葛根提取物對(duì)乙醇在大鼠體內(nèi)的代謝性相互作用，以及對(duì)肝臟、胃黏膜乙醇脫氫酶活性的影響，明確其作用及機(jī)制，為葛花及

3、葛根提取物作為解酒藥的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)，對(duì)我國(guó)傳統(tǒng)解酒中藥的現(xiàn)代化開(kāi)發(fā)利用具有重要意義。 基于以上所述，本研究分為四部分：第一部分，建立并驗(yàn)證檢測(cè)大鼠全血中乙醇濃度的頂空氣相色譜分析方法；第二部分，研究葛根及葛花提取物對(duì)大鼠口服乙醇藥動(dòng)學(xué)的影響；第三部分，研究葛根及葛花提取物對(duì)大鼠靜脈注射乙醇藥動(dòng)學(xué)的影響；第四部分，研究大鼠經(jīng)葛花及葛根提取物灌胃處理后其肝臟和胃黏膜乙醇脫氫酶酶活性的變化情況。 一、建立和驗(yàn)證檢測(cè)大

4、鼠全血中乙醇濃度的頂空氣相色譜(HS—GC)分析方法 目的：建立靈敏、特異、可靠、線性范圍廣的測(cè)定全血樣本中乙醇濃度的HS—GC方法。 方法：全血樣本以蛋白沉淀法進(jìn)行處理，內(nèi)標(biāo)為正丙醇，經(jīng)高速離心后，取0.8ml上清液注入4ml氣密瓶密封，在70℃水浴中平衡20min，采用2ml注射器進(jìn)樣抽取頂空瓶中氣體0.5ml，迅速注入進(jìn)樣口，這一過(guò)程在15秒內(nèi)完成。測(cè)定中的氣相色譜儀為VariantCP—3800，色譜分析柱為CP

5、—WAX52CB毛細(xì)管石英柱，規(guī)格為15m×0.32mm×0.32μm。FID檢測(cè)器溫度：230℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；分流比：1：10。程序升溫分離：初溫40℃恒溫1min以10℃/min升溫至65℃，恒溫1min。載氣流速：氮?dú)?.2ml/min；空氣300ml/min；尾吹氣30ml/min；氫氣30ml/min，隔墊吹掃2～5ml/min。 結(jié)果：乙醇的線性范圍為10mg/L～5000mg/L，檢測(cè)限為2.19mg/L

6、；乙醇與內(nèi)標(biāo)正丙醇的保留時(shí)間分別約為2.27min和3.07min。全血樣本中乙醇的線性相關(guān)程度良好(r2均大于0.99)。以質(zhì)控樣本計(jì)算該分析方法的準(zhǔn)確度在93.78％～99.52％范圍內(nèi)；日內(nèi)精密度在3.02％～9.15％范圍內(nèi)，日間精密度在4.02％～10.46％范圍內(nèi)；相對(duì)回收率均在95.02％～111.16％的范圍內(nèi)。檢測(cè)過(guò)程共3.5min，檢測(cè)周期為5min。 結(jié)論：該分析方法經(jīng)驗(yàn)證結(jié)果滿意，樣品處理及檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單、

7、快速，可滿足乙醇臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究的檢測(cè)要求。 二、葛花及葛根提取物對(duì)大鼠灌胃給予乙醇的藥動(dòng)學(xué)影響 目的：研究葛根及葛花提取物對(duì)大鼠口服乙醇藥動(dòng)學(xué)過(guò)程的影響。 方法：本研究預(yù)先采用葛花提取物400mg/kg和葛根提取物200mg/kg對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃預(yù)處理，對(duì)照組以等體積超純水代替，之后立即灌胃給予乙醇3.5g/kg。于給藥后的5、15、30、45min及1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、1

8、0.0、12.0h從頸靜脈插管中取血100μl，用頂空—?dú)庀嗌V法測(cè)定乙醇在大鼠體內(nèi)的血藥濃度變化。 結(jié)果：與對(duì)照組相比較，葛花提取物(400mg/kg)與葛根提取物(200mg/kg)的混合物與乙醇3.5g/kg同服，使乙醇的Cmax下降了34.98％(P=0.754)，AUC0-12h下降了51.26％(P=0.251)。給藥組的CL/F為對(duì)照組的3.19倍(P=0.028)，MRT下降了25.90％(P=0.047)。

9、 結(jié)論：葛花及葛根提取物與乙醇同服能降低大鼠體內(nèi)血醇濃度，加快乙醇在體內(nèi)的清除率，能有效地起到解酒作用。 三、葛根及葛花提取物對(duì)大鼠靜脈注射乙醇的藥動(dòng)學(xué)影響 目的：研究葛根及葛花提取物對(duì)大鼠靜脈注射乙醇的藥動(dòng)學(xué)影響。 方法：本研究預(yù)先采用葛花提取物400mg/kg和葛根提取物200mg/kg對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃預(yù)處理，對(duì)照組以等體積超純水代替，之后立即由頸靜脈注射乙醇1.0g/kg。于給藥后的1、3、5、10、20

10、、30、45min及1.0、1.25、1.5、1.75、2.0、2.5、3.0h從頸靜脈插管中取血100μl，用頂空—?dú)庀嗌V法測(cè)定乙醇在大鼠體內(nèi)的血藥濃度。 結(jié)果：口服葛花提取物(400mg/kg)與葛根提取物(200mg/kg)的混合物對(duì)靜注后乙醇在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程有以下影響：AUC0-3h有下降的趨勢(shì)，給藥組較對(duì)照組降低了10.21％，t1/2較對(duì)照組降低了14.29％，Cl降低了15.28％，但差別不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

11、 結(jié)論：靜脈注射乙醇1.0g/kg，給藥組與對(duì)照組藥動(dòng)學(xué)參數(shù)未發(fā)現(xiàn)顯著差異，但給藥組的AUC0-3h有下降的趨勢(shì)，較對(duì)照組降低了10.21％，其余參數(shù)也顯示給予提取物后乙醇在體內(nèi)的代謝有加快的趨勢(shì)。 四、葛花及葛根提取物對(duì)大鼠肝臟和胃黏膜乙醇脫氫酶酶活性的影響 目的：考察單獨(dú)服用乙醇和與葛花及葛根提取物同服后大鼠肝臟和胃黏膜乙醇脫氫酶酶活性的變化情況。 方法：本部分建立了大鼠乙醇脫氫酶的分離純化方法和酶活性

12、的檢測(cè)方法。將SD大鼠平均分為空白對(duì)照組、乙醇組、給藥組，每組5只?？瞻讓?duì)照組僅灌胃給予超純水；乙醇組僅給予乙醇3.5g/kg；給藥組在給予葛花提取物(400mg/kg)與葛根提取物(200mg/kg)后，給予乙醇3.5g/kg。大鼠經(jīng)灌胃處理1h后，斷頭處死，取肝及胃組織，制備肝、胃黏膜胞漿蛋白，測(cè)定乙醇脫氫酶活性。 結(jié)果： 酶活性單位為U/mgprotein。 P：三組組間差異。 a：與空白對(duì)照組相比

13、P<0.01;b：與空白對(duì)照組相比P<0.05，c：與乙醇組相比比P<0.05。 結(jié)論：口服乙醇會(huì)損傷胃黏膜和肝細(xì)胞，導(dǎo)致肝及胃黏膜ADH活性降低，而在葛花及葛根提取物的干預(yù)下，乙醇對(duì)肝及胃黏膜ADH的損傷程度降低，從而保護(hù)了ADH酶活性，使乙醇在體內(nèi)的代謝加快，降低血醇濃度，從而產(chǎn)生解酒作用。 本研究建立了大鼠全血樣本中乙醇濃度的頂空氣相色譜(HS—GC)分析方法，闡明了傳統(tǒng)中藥葛花及葛根會(huì)影響乙醇在SD大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)