CYP11B2-B1基因多態(tài)性與醛固酮瘤臨床表型及預(yù)后的相關(guān)研究.pdf

1、原發(fā)性醛固酮增多癥（簡(jiǎn)稱原醛，Primary Aldosteronism，PA）是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌高血壓之一，兩種常見(jiàn)臨床亞型為醛固酮瘤（Aldosterone Producing Adenoma，APA）和特發(fā)性醛固酮增多癥（Idiopathic Hyperaldosteronism，IHA）。原醛主要的病理生理特點(diǎn)是過(guò)多醛固酮的自主分泌。APA 多采用手術(shù)治療；盡管大多數(shù)原醛患者術(shù)后血壓恢復(fù)正常，但仍有33～44%術(shù)后持續(xù)性高血壓。然

2、而，目前過(guò)多醛固酮分泌的機(jī)制和術(shù)后血壓恢復(fù)不均一的機(jī)制仍不清楚。影響高血壓醛固酮代謝和血壓調(diào)控的遺傳因素是否與APA 過(guò)多醛固酮分泌和術(shù)后持續(xù)高血壓相關(guān)還仍不清楚。
　　 CYP11B2基因編碼合成醛固酮的醛固酮合酶；CYP11B1基因則編碼合成皮質(zhì)醇的11-β羥化酶，兩基因位置相近，均位于染色體8q24。研究表明兩基因座位上的許多DNA 多態(tài)性位點(diǎn)處于完全連鎖不平衡狀態(tài)（Linkage Disequilibrium，LD），且

3、CYP11B2基因多態(tài)性位點(diǎn)（如rs1799998，intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型和rs4539）與原發(fā)性高血壓、11-β羥化酶活性降低、醛固酮分泌與代謝失調(diào)，心血管風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。上述研究提示CYP11B2/B1 多態(tài)性位點(diǎn)可能與原醛臨床表型及術(shù)后血壓相關(guān)。在此假設(shè)基礎(chǔ)上，本研究對(duì)6個(gè)DNA 多態(tài)性位點(diǎn)，包括CYP11B2基因的rs1799998 (C-344T)、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539 (A2718G)、rs64

4、14和CYP11B1基因的rs6387 (G225A)、rs6410 (A2803G)進(jìn)行基因分型和單體型分析，以判斷它們對(duì)原醛中CYP11B2基因表達(dá)、臨床表型的影響，并探討它們?cè)谛g(shù)后持續(xù)高血壓中的作用。
　　 方法：
　　 1. 采用Dneasy Blood & Tissue 試劑盒（Qiagen公司)提取93例隨訪到的APA 患者的組織DNA；在公共SNP數(shù)據(jù)庫(kù)(http://ncbi.nlm.nih.gov/SN

5、P/和http://www.hapmap.org/)中選擇CYP11B2和CYP11B1基因中頻數(shù)≥0.05，且文獻(xiàn)報(bào)道與醛固酮代謝和高血壓相關(guān)的位點(diǎn)，包括CYP11B2基因的4個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)：rs1799998、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539和rs6416 及 CYP11B1基因的2個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)：rs6410和rs6387。采用一對(duì)獨(dú)立的PCR 擴(kuò)增intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型位點(diǎn)，其余5個(gè)位點(diǎn)采用MGB-Taqman

6、探針?lè)ㄟM(jìn)行基因分型。采用Haploview 4.0 分析LD和Hardy-Weinberg 平衡。
　　 2. 采用SYBR Green熒光定量RT-PCR法檢測(cè)69例APA組織和20例正常腎上腺組織(取自手術(shù)的腎癌患者)中CYP11B2和CYP11B1基因的表達(dá)，2-C△△T法計(jì)算APA組織中基因表達(dá)量相對(duì)正常腎上腺組織的變化。放射性免疫法檢測(cè)血漿醛固酮的濃度（PAC）和血漿腎素活性（PRA），并用Pearson相關(guān)分析它們與

7、基因表達(dá)的關(guān)系。
　　 3.在 Rstatistics program 2.7.0程序包中使用SNPassoc 1.5-3和Haplo.stats 1.3.8分析CYP11B2和CYP11B1基因型及單體型與CYP11B2基因表達(dá)量和血漿醛固酮濃度、收縮壓、舒張壓等臨床表型的關(guān)系。
　　 4. 在 R statistics program 2.7.0 程序包中使用SNPassoc 1.5-3和Haplo.stats 1.

8、3.8分析CYP11B2和CYP11B1基因型及單體型與原醛術(shù)后血壓恢復(fù)的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1.檢測(cè)了6個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)，其中5個(gè)位點(diǎn)（包括CYP11B2基因的rs1799998、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539和CYP11B1基因的rs6387、rs6410）在所有隨訪到的的APA 患者中均獲得成功檢測(cè)，等位基因頻數(shù)均>0.2，基因型頻數(shù)均>0.01。所有位點(diǎn)基因型分布均符合Hardy-Wein

9、berg 平衡 (對(duì)rs6387，rs6410，rs4539，intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型，rs1799998：P 分別為0.06，0.71，1.0，0.12，0.11)。配對(duì)的LD 分析表明rs6387與rs6410和rs1799998 存在著較強(qiáng)的LD(D ′ 0.95，0.73)，rs4593和 rs1799998及rs6410和intron 2 野生型/轉(zhuǎn)位型之間也有稍強(qiáng)的LD(D ′ 0.52)。
　　 2.在69例

10、APA和20例正常腎上腺組織中均檢測(cè)到CYP11B2 mRNA和CYP11B1mRNA的表達(dá)。相對(duì)正常腎上腺組織，APA組織中CYP11B2 mRNA表達(dá)明顯上調(diào)，為正常腎上腺組織的3.58 倍（p<0.01）。且APA組織中CYP11B2 mRNA表達(dá)與血漿醛固酮水平有明顯相關(guān)性（r=0.649，p<0.01），但與血漿腎素活性無(wú)關(guān)（r=-0.133，p=0.277）。APA組織CYP11B1 mRNA表達(dá)降低，是正常腎上腺組織的0.

11、54 倍，但兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.089）。APA組織中CYP11B1 mRNA表達(dá)與血漿腎素活性無(wú)相關(guān)性（r=-0.165，p=0.185），與血漿醛固酮水平也無(wú)相關(guān)性（r=-0.08，p=0.946）。
　　 3.單個(gè)位點(diǎn)分析中，未發(fā)現(xiàn)CYP11B2和 CYP11B1基因的多態(tài)性位點(diǎn)包括rs1799998、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539、rs410和rs6387與CYP11B2基因mRNA表達(dá)，血漿醛固

12、酮濃度，術(shù)前收縮壓、舒張壓相關(guān)（p 均>0.05）。單體型分析中，GlobalScore 統(tǒng)計(jì)顯示：CYP11B2-CYP11B1單體型與CYP11B2mRNA表達(dá)量增加相關(guān)（global-stat=16.18，df=8，p=0.04），與血漿醛固酮水平也相關(guān)（global-stat=20.41，df=8，p=0.009）；但與術(shù)前收縮壓和舒張壓不相關(guān)（分別p=0.34，p=0.54）。多元回歸分析發(fā)現(xiàn)單體型H1和H3與CYP11B2基

13、因mRNA的表達(dá)上調(diào)相關(guān)（經(jīng)過(guò)Bonferroni 校正后分別p=0.02；0.03），H6、H10和H16與過(guò)多的醛固酮分泌相關(guān)（經(jīng)過(guò)Bonferroni 校正后分別p=0.015；0.003；p=0.049）；但未見(jiàn)有單體型與術(shù)前收縮壓和舒張壓相關(guān)（p均>0.05）。
　　 4.單個(gè)位點(diǎn)分析：上述五個(gè)位點(diǎn)包括rs1799998、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539、rs410和rs6387中只有rs4539 (AA)

14、與術(shù)后持續(xù)性高血壓相關(guān)（經(jīng)過(guò)Bonferroni 校正后p=0.01）。單體型分析中：Global Score 統(tǒng)計(jì)顯示CYP11B2-CYP11B1單體型與原醛術(shù)后血壓恢復(fù)相關(guān)（Max-Stat sim. P=0.006）；多元回歸分析中發(fā)現(xiàn)單體型H1和H3是預(yù)測(cè)術(shù)后持續(xù)性高血壓的遺傳性危險(xiǎn)因子（經(jīng)過(guò)Bonferroni 校正后，分別p=0.02;0.03）。另外，傳統(tǒng)因素包括高血壓持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，有高血壓家族史和術(shù)前較高的收縮壓是術(shù)后恢

15、復(fù)不好的傳統(tǒng)風(fēng)險(xiǎn)因素（經(jīng)過(guò)Bonferroni 校正后，分別p=0.002，=0.0015，<0.00005）。
　　 結(jié)論：
　　 1.對(duì)隨訪到的93位APA 患者獲得了較為完善的CYP11B2和 CYP11B1基因多態(tài)性的遺傳學(xué)資料，為后續(xù)證實(shí)CYP11B2/B1基因多態(tài)性和臨床表型關(guān)系的研究提供了基礎(chǔ)。
　　 2. APA患者血漿醛固酮的過(guò)多分泌可能與CYP11B2基因的表達(dá)上調(diào)有關(guān)，而后者可能與APA組織

16、中出現(xiàn)CYP11B1基因的表達(dá)相關(guān)。
　　 3. 盡管作用較弱，本研究顯示APA患者CYP11B2和 CYP11B1基因多態(tài)性可能通過(guò)上調(diào)CYP11B2的表達(dá)，導(dǎo)致血漿醛固酮水平的升高。
　　 4. 盡管作用較弱，本研究顯示APA 患者術(shù)后血壓可能受到CYP11B2/CYP11B1基因多態(tài)性的影響。提示遺傳因素在APA 患者術(shù)后血壓恢復(fù)不均一的機(jī)制中可能起一定的作用，單體型H1和H3可能成為預(yù)測(cè)術(shù)后持續(xù)性高血壓的遺傳指標(biāo)