BCA3調(diào)控巨噬細(xì)胞功能的研究.pdf

1、背景:乳腺癌相關(guān)基因BCA3(breast cancer-associated gene)是2003年發(fā)現(xiàn)在乳腺癌和前列腺癌細(xì)胞中高表達(dá)的一個(gè)新基因。BCA3蛋白富含脯氨酸,具有多個(gè)蛋白結(jié)合位點(diǎn)和磷酸化位點(diǎn)。BCA3可以通過與RING1競爭結(jié)合KyoT2,拮抗RING1對RBP-J轉(zhuǎn)錄活性的抑制,進(jìn)而調(diào)控Notch信號通路。BCA3也可以與PKA相互作用,故而被稱為PKA相互作用蛋白(PKA-interacting protein,AK

2、IP1);BCA3與PKA催化亞基結(jié)合,通過影響p65磷酸化調(diào)節(jié)NFκB的轉(zhuǎn)錄活性。BCA3參與這些重要信號通路的調(diào)控,提示它可能在多種細(xì)胞生物學(xué)活性中發(fā)揮一定的調(diào)節(jié)作用。研究提示,BCA3可以通過與TAp73相互作用,借助線粒體途徑促進(jìn)放療引起的宮頸癌細(xì)胞凋亡,增加宮頸癌細(xì)胞對放療的敏感性。BCA3與Rac1相互作用能顯著減弱CSF-1誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞的遷移能力。破骨細(xì)胞是一類分布在骨組織中的巨噬細(xì)胞,這提示BCA3可能參與調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞

3、的功能。巨噬細(xì)胞是機(jī)體的重要免疫細(xì)胞,大量研究表明巨噬細(xì)胞功能異常與自身免疫病、腫瘤等多種疾病密切相關(guān)。因此,探討腫瘤相關(guān)基因BCA3在巨噬細(xì)胞以及免疫系統(tǒng)中的生物學(xué)功能對進(jìn)一步闡述免疫應(yīng)答機(jī)制以及多種疾病的治療有重要指導(dǎo)意義。
　　目的:探討B(tài)CA3對巨噬細(xì)胞功能的調(diào)控及其機(jī)制。
　　方法:通過Western blot的方法檢測BCA3在多種免疫細(xì)胞和免疫組織中的表達(dá);體外誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞為巨噬細(xì)胞,Western blo

4、t的方法檢測在巨噬細(xì)胞分化過程中BCA3蛋白表達(dá)量的變化;以RAW264.7和U937為細(xì)胞模型,借助慢病毒感染的方法敲低BCA3的表達(dá),分析細(xì)胞生物學(xué)功能改變,主要關(guān)注對炎癥刺激的反應(yīng)性,包括吞噬功能、分泌細(xì)胞因子、細(xì)胞表面分子等的變化;利用LPS注射小鼠腹腔構(gòu)建炎癥動(dòng)物模型,探索炎癥條件下,巨噬細(xì)胞功能與BCA3的關(guān)系。通過Western blot等方法探討巨噬細(xì)胞中BCA3對NFκB轉(zhuǎn)錄活性的影響,初步分析BCA3參與調(diào)控巨噬細(xì)胞

5、功能的潛在機(jī)制;借助基因芯片技術(shù),分析BCA3基因參與生物學(xué)活性的信號通路網(wǎng)絡(luò)。
　　結(jié)果:BCA3在多種免疫相關(guān)細(xì)胞系和免疫組織中高表達(dá);隨著巨噬細(xì)胞逐步分化成熟, BCA3蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)。在RAW264.7和U937細(xì)胞模型中,敲低BCA3顯著增強(qiáng)LPS等介導(dǎo)的炎癥反應(yīng):吞噬功能增強(qiáng);分泌炎性因子IL-6、TNFα增加;表達(dá)IL-8、IL-12、IL-10 mRNA上調(diào);特異性的細(xì)胞表面標(biāo)志分子CD14、CD11b、CD8

6、6等表達(dá)增強(qiáng)。WB結(jié)果提示,敲低BCA3后,p65組成性表達(dá)上調(diào),在LPS等炎性因子刺激下, p65磷酸化增強(qiáng)。小鼠炎癥模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:在炎癥初期,巨噬細(xì)胞中BCA3表達(dá)顯著下調(diào)?；蛐酒瑪?shù)據(jù)分析顯示BCA3下調(diào)可以影響Toll樣受體、PPAR等信號通路;引起細(xì)胞遷移、抗原呈遞、細(xì)胞黏附等生物學(xué)活性相關(guān)分子的表達(dá)譜改變。
　　結(jié)論:BCA3蛋白高表達(dá)于各類免疫細(xì)胞中,并且可以通過影響NFκB信號通路,參與調(diào)控巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反