兒童麻疹疫苗接種后遠(yuǎn)期疫苗特異性初始T細(xì)胞及記憶T細(xì)胞的表型研究.pdf

1、目的:
　　通過研究兒童接種麻疹疫苗遠(yuǎn)期特異性初始T細(xì)胞和記憶T細(xì)胞的表型特征,為接種麻疹疫苗的遠(yuǎn)期效果和新的接種策略提供理論指導(dǎo)。
　　方法:
　　(1)在家長志愿的基礎(chǔ)上選擇2003年12月~2010年9月在深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院接種麻疹疫苗的3~10歲兒童為研究對象32例;
　　(2)抽取外周靜脈血3ml,分離淋巴細(xì)胞加入麻疹疫苗進(jìn)行培養(yǎng),設(shè)加麻疹疫苗組為實(shí)驗(yàn)組,未加疫苗組為對照組,置5％CO2、37℃培養(yǎng)

2、箱中培養(yǎng)50h;以FCM分別檢測細(xì)胞表面分子:CD4/CD8、CD45RA、CD45RO、CD62L、CCR7;
　　(3)外周靜脈血分離淋巴細(xì)胞加入麻疹疫苗進(jìn)行培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)設(shè)未加疫苗組為對照組,置5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)50h后加入CCK-8試劑繼續(xù)培養(yǎng)1h;以CCK-8法檢測細(xì)胞增殖,計(jì)算細(xì)胞增殖指數(shù)。
　　結(jié)果:
　　(1)對麻疹疫苗接種32例兒童外周血細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng),以FCM檢測CD4+、CD8+細(xì)胞,結(jié)

3、果外周血PBMC中CD4+和CD8+T細(xì)胞所組成比例以CD4+T細(xì)胞為優(yōu)勢,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性差異P﹤0.05。
　　(2)用FCM檢測CD4+/CD8+CD45RA+初始T細(xì)胞亞群,CD4+CD45RA+初始T細(xì)胞對照組與實(shí)驗(yàn)組均高達(dá)70%以上;CD8+CD45RA+初始 T細(xì)胞對照組與實(shí)驗(yàn)組均高達(dá)80%以上,組間比較均無顯著差異,P﹥0.05;同時(shí)按照抗體水平高低分三組進(jìn)行比較,組間比較均無顯著差異,P﹥0.05。
　

4、　(3)用 FCM檢測 CD4+/8+CD45RO+記憶 T細(xì)胞亞群,CD4+CD45RO+對照組28.12%,實(shí)驗(yàn)組29.55%,二組比較均無顯著差異,P﹥0.05;CD8+CD45-RO+對照組17.35%,實(shí)驗(yàn)組21.89%,二組比較均無顯著差異,P﹥0.05;同時(shí)按照抗體水平高低分三組進(jìn)行比較,組間比較均無顯著差異,P﹥0.05。
　　(4) CD4+記憶T細(xì)胞根據(jù)歸巢受體(CD62L)和趨化因子受體(CCR7)的表達(dá),C

5、CR7+亞群檢測對照組84.37%,實(shí)驗(yàn)組84.47%,CD62L+亞群檢測對照組93.60%,實(shí)驗(yàn)組95.00%,組間比較無顯著差異,P﹥0.05。CD8+記憶T細(xì)胞CCR7+亞群檢測對照組47.24%,實(shí)驗(yàn)組50.55%;CD62L+亞群檢測對照組61.30%,實(shí)驗(yàn)組65.89%,組間比較無顯著差異,P﹥0.05。
　　(5)按麻疹疫苗接種后3-5年、6-7年、8-10年的不同時(shí)間分析CD4/CD8細(xì)胞CD45RA+、CD45

6、RO+、CCR7+和CD62L+不同亞群,結(jié)果疫苗接種后不同時(shí)間T細(xì)胞的亞群均無差異,P﹥0.05。
　　(6)應(yīng)用CCK-8法檢測疫苗刺激后疫苗特異性細(xì)胞增殖情況,檢測結(jié)果可見細(xì)胞增殖指數(shù)均大于0.8,大于1.0在本研究中為17例,占54.84%。
　　結(jié)論:
　　(1)麻疹病毒是細(xì)胞內(nèi)感染,因此對麻疹疫苗誘導(dǎo)機(jī)體的免疫力,研究記憶細(xì)胞具有十分重要的意義,本研究表明麻疹疫苗接種兒童T細(xì)胞以CD4+為優(yōu)勢細(xì)胞,其初始T

7、細(xì)胞CD45RA+高達(dá)70%~80%。
　　(2)麻疹疫苗接種兒童根據(jù)CD45RA-/CD45RO+的表達(dá),CD8+記憶T細(xì)胞在17%左右,CD4+記憶T細(xì)胞高達(dá)28%~29%,記憶T細(xì)胞與抗體水平高低無關(guān),其CD4+記憶T細(xì)胞為主要表型特征。
　　(3)麻疹疫苗接種兒童根據(jù)CCR7和CD62L表達(dá)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),記憶T細(xì)胞亞群具有多樣性,本研究均以中央型記憶細(xì)胞為主要表型特征;細(xì)胞增殖指數(shù)大于1的高達(dá)54.84%,表明疫苗