雷帕霉素減輕小鼠氣管移植物上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及阻塞性氣道疾病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分:建立小鼠閉塞性細(xì)支氣管炎模型
　　實(shí)驗(yàn)背景:近年來眾多學(xué)者建立了多種動物模型來研究肺移植術(shù)后阻塞性細(xì)支氣管炎(obliterativebronchiolitis,OB)的發(fā)病機(jī)制。在本研究中,我們在移植術(shù)后一段時間內(nèi)比較幾種常見的OB模型的特點(diǎn)。
　　實(shí)驗(yàn)方法:受體小鼠分組后分別接受原位氣管移植,大網(wǎng)膜下氣管異位移植以及皮下氣管異位移植。氣管移植物分別在術(shù)后14、21以及28天,進(jìn)行組織學(xué)或者免疫組織化學(xué)評估。

2、r>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:移植術(shù)后,來自不同移植部位的同種氣管移植物基本保持了正常的組織學(xué)結(jié)構(gòu),而與各移植部位相應(yīng)的異種移植物的氣道出現(xiàn)明顯的阻塞,同時在各個實(shí)驗(yàn)觀測時間點(diǎn)時伴有更多的CD4+/CD8+單個核細(xì)胞核肌纖維細(xì)胞的浸潤,但是新生的上皮細(xì)胞核新生血管明顯減少(P<0.05)。與兩種異位氣管異種移植物相比較,原位異種移植物的氣管的管腔相對通暢,伴有明顯較少的CD4+/CD8+單個核細(xì)胞核肌纖維細(xì)胞的浸潤,但是卻有明顯更多的新生上皮細(xì)胞和

3、新生血管形成(P<0.05)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,小鼠原位氣管移植可以被用作研究OB發(fā)展早期病變的模型,而異位氣管移植可以作為OB晚期的研究模型。
　　第二部分:上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化在小鼠氣管移植模型中的作用
　　研究背景:在患有細(xì)支氣管閉塞綜合征(BronchiolitisObliteransSyndrome,BOS)的肺移植患者的移植肺中,常出現(xiàn)氣道正常上皮損傷,而大量纖維疤痕組織增生的氣道重構(gòu)。在本

4、研究中,我們假設(shè)小鼠氣管原位移植模型中移植氣管上皮在出現(xiàn)阻塞性氣道疾病時出現(xiàn)上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。
　　實(shí)驗(yàn)方法:受體小鼠分為同種異體(Balb/CtoC57BL/6)以及同種自體(Balb/CtoBalb/C)組,分別接受原位氣管移植。移植術(shù)后受體小鼠均不使用免疫抑制劑治療。將受體氣管移植物分別在術(shù)后14、21以及28天進(jìn)行組織學(xué)或者免疫組織化學(xué)評估。

5、　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:移植術(shù)后,同種自體氣管移植物組織學(xué)結(jié)構(gòu)基本保持正常,與之相比同種異體氣管移植物的管腔較為狹窄(P<0.05)。術(shù)后與同種自體氣管移植比較,同種異體氣管移植物氣道上皮內(nèi)正常上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)較低,而間質(zhì)標(biāo)志物α-SMA增高,上皮損傷以及EMT標(biāo)志物MMP-9表達(dá)增高(P<0.05)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在小鼠氣管移植模型中OAD的發(fā)生伴有氣道上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象。因此提供治療OB的可能靶點(diǎn)

6、。
　　第三部分:雷帕霉素抑制小鼠氣管移植物中EMT的發(fā)生,減少阻塞性氣道疾病
　　實(shí)驗(yàn)背景:雷帕霉素(RAPA)作為免疫抑制劑用來治療多種實(shí)體器官免疫排斥反應(yīng)。雷帕霉素能改善肺移植患者術(shù)后肺功能,但是由于諸多不良反應(yīng),許多患有BOS的肺移植患者無法耐受雷帕霉素的治療。在本實(shí)驗(yàn)中,我們試圖研究小劑量雷帕霉素對同種異體小鼠氣管移植物的治療效果。
　　實(shí)驗(yàn)方法:受體小鼠分組后分別接受原位氣管移植,術(shù)后根據(jù)分組給予不同劑量的

7、雷帕霉素+助溶劑(實(shí)驗(yàn)組)或者單獨(dú)給予助溶劑(載體對照組)。各組受體小鼠的氣管移植物分別在移植術(shù)后第28天,進(jìn)行組織病理學(xué)、免疫組織化學(xué)、Western-Blot以及流式細(xì)胞學(xué)評估。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與各實(shí)驗(yàn)組比較,載體照組中同系異體小鼠氣管移植物的氣道管腔明顯狹窄(P<0.05),上皮發(fā)生明顯的上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化:E-Cadherin表達(dá)降低(P<0.05),α-SMA以及MMP-9表達(dá)升高,移植氣管上以及外周血中纖維細(xì)胞的表達(dá)水平均