吉西他濱對慢粒細胞G-CSFR及bcr-abl mRNA的影響.pdf

1、目的:
　　隨著分子生物學的發(fā)展,核苷類抗代謝物已經(jīng)成為抗腫瘤藥物研究的重要內(nèi)容。吉西他濱(Gemcitabine,GEM)是一種新型的脫氧胞苷類似物和核苷還原酶抑制劑,屬抗代謝類抗腫瘤藥物,目前已被廣泛應用于實體瘤的治療,因其療效肯定,副作用小已被美國FDA批準為非小細胞肺癌、乳腺癌以及胰腺癌的一線化療藥。
　　國外有關該藥物對白血病的治療尚處于基礎研究及臨床試驗階段,國內(nèi)偶見吉西他濱用于難治及復發(fā)淋巴瘤的報道,研究表明吉

2、西他濱體外可誘導髓系白血病株HL-60細胞凋亡,抑制HL-60細胞系增殖。粒細胞集落刺激因子(graunlocyte colony-stimulating factor,G-CSF)是一種重要的造血生長因子,它與粒細胞集落刺激因子受體(G-CSF receptor,G-GSFR)結合,通過復雜的信息傳導系統(tǒng),特異地調節(jié)粒系細胞的增殖與分化,并增強成熟粒細胞的功能,在機體應激防御系統(tǒng)中起重要作用。73％-79％的造血干細胞及93％的造血祖

3、細胞表面有G-CSFR的存在,且G-CSFR的數(shù)量隨著細胞的成熟而增加,因此,G-CSFR的表達在某種程度上反映了細胞的分化程度。
　　人類成熟的粒細胞表面有200-1000 R/細胞,而在幼稚細胞表面G-CSFR的數(shù)量相對較少,約為正常粒細胞的百分之一。慢性粒細胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)病人的BCR/ABL融合基因高表達可以通過下調C/EBPalpha抑制骨髓祖細胞G-CSFR的

4、轉錄,造成了CML病人骨髓細胞G-CSFR的表達率降低。G-CSFR表達率的下降能影響G-CSF生理效應的發(fā)揮,使細胞分化障礙;C/EBPalpha可誘導骨髓前體細胞向粒系分化,它的下調會阻止髓系分化,因此C/EBPalpha的下調和G-CSFR表達率降低可能導致CML患者骨髓粒系分化障礙,這可能是CML慢性期患者進入到急變期的誘因之一。
　　本研究將吉西他濱作用于CML骨髓細胞,觀察吉西他濱對CML患者骨髓細胞BCR/ABL融合

5、基因mRNA及骨髓粒系G-CSFR表達的作用,為其可能作為新的CML治療藥物提供實驗依據(jù),探討應用吉西他濱治療白血病的可能性。
　　方法:
　　1.選擇CML慢性期初治患者23例、CML急變期患者8例及正常對照組10例,每例取骨髓液6ml制備骨髓單個核細胞懸液,分為吉西他濱組和未加藥組,吉西他濱組加入吉西他濱,調整濃度為10μg/ml,用含體積分數(shù)10％胎牛血清的1640培養(yǎng)液培養(yǎng),置于37℃,5％CO~2飽和濕度的孵箱中培

6、養(yǎng)48h后收集細胞,未加藥組接種于含體積分數(shù)10％胎牛血清的1640培養(yǎng)液(Gibco公司產(chǎn)品)中,置于37℃,5％CO~2飽和濕度的孵箱中培養(yǎng)48h后收集細胞。
　　2.將收集的細胞進行以下檢測:①流式細胞儀檢測細胞表面G-CSFR的表達;②逆轉錄聚合酶鏈反應檢測bcr/abl mRNA的表達。
　　3.所得結果應用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件處理,統(tǒng)計學數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差((?)±s)表示,多樣本均數(shù)的比較采用方差分析,以

7、α=0.05為檢驗水準。G-CSFR表達率用均數(shù)±標準差((?)±s,％)表示,同時采用直線相關性檢驗分析G-CSFR與bcr/abl mRNA表達水平之間有無相關性。
　　結果:
　　1.G-CSFR在各組標本中的表達流式細胞儀檢測顯示:吉西他濱組CML慢性期、急變期患者骨髓粒系G-CSFR的表達分別為(50.72±8.57)％和(36.32±4.25)％,正常對照組G-CSFR的表達為(59.42±7.62)％;未加藥組

8、CML慢性期、急變期患者骨髓粒系G-CSFR的表達分別為(45.42±6.52)％和(32.58±5.68)％,正常對照組G-CSFR的表達為(58.56±5.54)％。吉西他濱組和未加藥組CML慢性期、急變期骨髓粒系G-CSFR的表達明顯低于正常人(P<0.05),CML慢性期患者高于急變期(P<0.05)。吉西他濱組CML慢性期、急變期骨髓細胞G-CSFR的表達率高于未加藥組(P<0.05),該組正常對照組G-CSFR的表達率與未加

9、藥組無明顯差異(P>0.05)。
　　2.bcr/abl mRNA在各組標本中的相對表達水平逆轉錄聚合酶鏈反應檢測結果顯示:反應產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后凝膠掃描成像系統(tǒng)照相,定性判斷目的基因相對參照基因表達量的變化,電泳結果經(jīng)凝膠掃描成像系統(tǒng)灰度掃描,定量分析目的基因表達量的變化,以bcr/abl/β-actin的比值表示目的基因mRNA的相對表達水平。
　　吉西他濱組CML慢性期、急變期患者bcr/abl mRNA的相對表達

10、水平分別為0.59±0.15和0.60±0.13;未加藥組CML慢性期、急變期患者bcr/abl mRNA的相對表達水平分別為0.60±0.10和0.63±0.11。吉西他濱組CML慢性期患者bcr/abl mRNA的相對表達水平明顯低于未加藥組(P<0.05),吉西他濱組CML急變期患者bcr/abl mRNA的相對表達水平明顯低于未加藥組(P<0.05)。
　　3.G-CSFR與bcr/abl mRNA相對表達水平的相關性分析

11、吉西他濱組與未加藥組CML慢性期、急變期G-CSFR的表達率與bcr/abl mRNA的相對表達水平呈負相關(P<0.05)。
　　結論:
　　1.G-CSFR在CML慢性期、急變期患者中低表達。
　　2.CML慢性期G-CSFR的表達高于急變期。
　　3.在體外培養(yǎng)下吉西他濱可以提高CML慢性期、急變期患者G-CSFR的表達。4.CML慢性期、急變期患者G-CSFR與bcr/abl mRNA的相對表達水平呈負相