IBDV超強(qiáng)毒株GX8-99株VP3基因及其A節(jié)段3’端非編碼區(qū)基因與致病性的關(guān)系.pdf

1、傳染性法氏囊病(IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的急性接觸性傳染病，是危害世界養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一。IBDV主要侵害雛雞的中樞免疫器官(法氏囊)，導(dǎo)致免疫抑制。1957年本病首次在美國(guó)的特拉華州的甘布羅鎮(zhèn)(Gumboro)的肉雞群中發(fā)生，20世紀(jì)80年代美國(guó)又發(fā)現(xiàn)了變異株，歐洲國(guó)家首先報(bào)道有超強(qiáng)毒株(vvIBDV)出現(xiàn)，90年代初vvlBDV傳至中國(guó)及亞洲其它國(guó)家和地區(qū)。IBD給養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為探討。vvI

2、BDV基因變異與致病性之間的關(guān)系，本研究以vvIBDVGX8/99株為研究對(duì)象，將vvlBDV GX8/99株進(jìn)行傳代，研究從原始毒(雞源毒)→雞胚毒→細(xì)胞適應(yīng)毒→細(xì)胞克隆化毒→回傳SPFX鳥傳代毒(雞源毒)→個(gè)輪回各代次毒VP3、A節(jié)段3’非編碼區(qū)核苷酸及氨基酸與致病性之間的關(guān)系，這將為進(jìn)一步構(gòu)建含有人工突變的特定基因片段或基因位點(diǎn)的IBDV傳染性克隆，從而反證與IBDV毒力基因相關(guān)的位點(diǎn)提供依據(jù)。 本研究共分2部分：

3、 一、GX8/99株原始毒及傳代毒VP3基因與致病性的關(guān)系： 為了研究超強(qiáng)毒雞傳染性法氏囊病病毒(vvIBDV)的致病性與其VP3基因變化的關(guān)系，將vvIBDV GX8/99株囊毒在SPF雞胚連傳10代后，再在雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)上連續(xù)盲傳至23代時(shí)開(kāi)始引發(fā)CEF細(xì)胞病變，隨之用無(wú)限稀釋法連續(xù)克隆2次后獲得病毒克隆，再將該克隆化病毒分別連續(xù)回傳3～5周齡SPF雞20代。分別比較細(xì)胞毒及其克隆化毒回傳SPF雞后不同傳代毒中VP

4、3氨基酸分子的變化。結(jié)果表明：相對(duì)于原始囊毒，細(xì)胞毒(C25)在測(cè)序的VP3區(qū)域中有4個(gè)位點(diǎn)發(fā)生突變，并且變得與疫苗毒D78完全一致。而在回雞的過(guò)程中，4個(gè)突變位點(diǎn)中的大多數(shù)氨基酸不再發(fā)生變化，而第228位氨基酸在細(xì)胞致弱過(guò)程中由P突變?yōu)榧?xì)胞適應(yīng)毒的L后，在回雞過(guò)程中又變回P(B15)。這初步揭示了VP3中的氨基酸變異與病毒的致病性有一定關(guān)系，而且也可能與細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中及SPF雞傳代過(guò)程中組織的親和性有一定的關(guān)系。 二、 Gx8

5、/99株原始毒及傳代毒A節(jié)段3，端非編碼區(qū)基因與致病性的關(guān)系： 為了研究超強(qiáng)毒雞傳染性法氏囊病病毒(vvIBDV)的致病性與其A節(jié)段3’端非編碼區(qū)基因變化的關(guān)系，本試驗(yàn)對(duì)vvIBDV GX8/99株各代次毒中A節(jié)段3’端非編碼區(qū)氨基酸序列進(jìn)行了比較，結(jié)果表明：與超強(qiáng)毒HK46、D6948和GX株相比， GX8/99株的第20位氨基酸L為特有的，而與Cu-1M、P2、CEF94等弱毒株一致，且該位點(diǎn)在整個(gè)傳代過(guò)程中比較穩(wěn)定、沒(méi)有突