西達本胺抑制骨髓瘤細胞自噬并促進DDR相關的凋亡反應.pdf

1、目的：
　　表觀遺傳學是近年來遺傳學的研究熱點。組蛋白氨基酸殘端的甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化修飾等可以通過改變組蛋白和DNA的相互親和力從而導致基因轉錄發(fā)生改變。多項研究表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與組蛋白乙酰化狀態(tài)（由組蛋白乙酰轉移酶HAT和組蛋白去乙?；窰DAC共同調控）關系密切。組蛋白去乙?；敢种苿℉DACi）作為一種特異性靶向抗腫瘤藥物越來越引起人們的關注，目前FDA已批準 HDAC抑制劑伏立諾他（Vorinostat，

2、SAHA）和羅咪酯肽（Romidepsin）用于治療皮膚及外周T細胞淋巴瘤，批準帕比司他（Panobinostat）治療多發(fā)性骨髓瘤。
　　多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一種漿細胞惡性腫瘤，臨床上經過DNA損傷性化療、蛋白酶體抑制劑、免疫調節(jié)劑（沙利度胺或來那度胺）及大劑量化療聯(lián)合自體干細胞移植等治療后，大多數(shù)患者最終仍出現(xiàn)疾病復發(fā)或者進展，因此，尋找更有效的治療手段一直是MM治療領域的研究熱點。西達本胺

3、是我國第一個自主研發(fā)的組蛋白去乙?；敢种苿℉DACi），可以抑制 HDAC1、2、3和10亞型的活性。在晚期腫瘤患者的Ⅰ期臨床研究中，西達本胺體現(xiàn)了良好的耐受性，目前已有研究證明，西達本胺對肺癌、結腸癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌及淋巴瘤有抑制或殺傷活性，我國正在開展針對皮膚T細胞淋巴瘤（PTCL）及外周T細胞淋巴瘤（CTCL）的Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗，初步統(tǒng)計結果提示療效十分顯著。綜上述，HDACi（如伏立諾他、羅咪酯肽、帕比司他）均有抗M

4、M活性，但單藥治療顯示出了劑量依賴性的副作用，使得HDACi治療骨髓瘤收到了限制；同時西達本胺治療難治復發(fā)型PTCL顯示出了極好的療效。因此，我們設想MM的乙?；癄顟B(tài)與MM細胞活性密切相關，目前有關西達本胺抗MM活性尚未見相關報道，故本課題選擇人多發(fā)性骨髓瘤細胞系RPMI8226、H929為實驗對象，觀察西達本胺對人多發(fā)性骨髓瘤細胞的抑制作用并探索其可能的機制。
　　方法：
　　①MTT法研究組蛋白去乙?；敢种苿┪鬟_本胺對

5、RPMI8226及H929細胞增殖的影響；②流式細胞術檢測西達本胺作用后細胞凋亡率的變化及細胞周期分布情況；③RT-PCR檢測西達本胺對MM細胞SIRT1基因、自噬相關基因mRNA表達的影響；④Western blot法檢測西達本胺處理MM細胞48h后周期相關蛋白p21、自噬相關蛋白、DNA損傷相關蛋白及凋亡相關蛋白表達情況；⑤采用 ATM激酶特異性抑制劑KU-55933抑制ATM激酶活性，研究ATM在西達本胺調控MM細胞增殖中的作用。

6、結果：
　?、傥鬟_本胺顯著抑制MM細胞的增殖；②西達本胺上調p21蛋白，使細胞周期阻滯于G0/G1期；③西達本胺處理后的MM細胞DNA損傷相關蛋白γH2AX、pATM及凋亡相關蛋白Cleaved Caspase-3表達水平升高；④KU-55933抑制ATM激酶活性后，部分逆轉由西達本胺誘導的MM細胞DNA損傷和凋亡反應；⑤西達本胺抑制SIRT1基因的轉錄及表達，上調組蛋白 H4K16的乙?；?；⑥西達本胺下調自噬相關基因ATG7