低劑量砷聯合Cyclopamine協(xié)同抑制非雄激素依賴的前列腺癌PC3細胞生長的實驗研究.pdf

1、目的:前列腺癌(Prostatic cancer,Pca)是西方國家最常見的男性惡性腫瘤，而近年我國該病發(fā)病率亦逐年上升，大部分患者最終會進展為非雄激素依賴的Pca，但目前尚無公認可以有效的治療非雄激素依賴Pca的手段。因此，尋求可以有效治療非雄激素依賴前列腺癌的新的治療手段是目前臨床迫切需要解決的問題。三氧化二砷(Arsenic trioxide，As203，ATO)已被證實對于治療復發(fā)性或難治性急性早幼粒細胞白血病(APL)具有良好

2、療效。但某些二期臨床試驗結果發(fā)現單獨用ATO治療一些實體瘤，如轉移性腎細胞癌或轉移性黑色素瘤，其療效相對有限。故尋找一種輔助藥物，與ATO聯合使用，使低濃度的ATO發(fā)揮高濃度的作用效果，并降低潛在的毒副作用，很有可能是一種改進ATO治療某些實體腫瘤的可行有效的方法。Hedgehog(Hh)信號通路晚期前列腺癌中呈高表達。最近研究表明ATO能夠通過抑制Hh信號通路下游GLI蛋白而抑制尤文肉瘤和生神經管細胞瘤的增殖;而Smo阻滯劑Cyclo

3、pamine(CYC)亦可通過對Hh信號通路的阻滯作用而抑制前列腺癌等腫瘤的生長。故本實驗選取非雄激素依賴前列腺癌PC3細胞為研究對象，觀察低劑量三氧化二砷聯合Cyclopamine對PC3細胞的抑制作用及其可能的分子作用機制。
　　方法:1.運用免疫熒光及DAPI染色鑒定PC3細胞及PC3細胞內HH-GLI信號通路的表達情況。2.采用MTT比色法檢測不同濃度ATO及Cyclopamine單獨或聯合使用對不同的時間點PC3細胞生長

4、的抑制。3.應用裸鼠致瘤實驗進一步驗證ATO聯合Cyclopamine對PC3細胞生長的抑制效果。4.Real-time PCR法檢測ATO聯合Cyclopamine對PC3細胞內Hh信號通路中重要分子的mRNA的表達的影響。5.檢測ATO聯合Cyclopamine對PC3細胞內細胞凋亡及細胞周期的影響。
　　結果:1.免疫熒光劑DAPI染色結果顯示腫瘤增殖抗原Ki67、前列腺特異性膜抗原PSAM及HH-GLI1信號通路中重要的核

5、內轉錄因子GLI1均在PC3細胞中呈高表達2.MTT結果顯示ATO或Cyclopamine單獨使用均能抑制PC3細胞的生長，呈現明顯的劑量及時間依賴性;二者聯合使用則優(yōu)于單劑量、甚至二倍劑量的ATO或Cyclopamine，經Chou's公式分析二者可顯著協(xié)同抑制PC3細胞生長。3.動物實驗進一步顯示ATO聯合Cyclopamine使用較單劑量組更能明顯抑制PC3細胞移植瘤的生長(p＜0.05)。4.Real-time PCR分析結果顯

6、示ATO聯合Cyclopamine使用較單劑量組更明顯下調Hh信號通路中GLI1蛋白mRNA的表達(p＜0.05)。5.流式細胞術檢測結果顯示，ATO聯合Cyclopamine使用具有輕微誘導凋亡作用，且較單劑量組能更明顯阻滯PC3細胞于S期(p＜0.01)。
　　結論:低劑量砷聯合Cyclopamine能協(xié)同抑制非雄激素依賴前列腺癌PC3細胞的生長，其機制與二者聯合使用可更明顯下調PC3細胞中Hh信號通路中GLI1蛋白、改變細胞