BV2細(xì)胞在不同損傷神經(jīng)環(huán)境下CD200R表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　 小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最具有代表性的免疫細(xì)胞。自1891年首次描述小膠質(zhì)細(xì)胞以來,其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中作用越來越受到人們的重視。小膠質(zhì)細(xì)胞在帕金森病(PD)、阿爾茲海默病(AD)及腦部炎癥、缺血等多種神經(jīng)系統(tǒng)病變中發(fā)揮著損傷和修復(fù)的雙重作用?；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的固有免疫反應(yīng)中有許多作用,包括免疫炎癥、誘導(dǎo)、吞噬作用、細(xì)胞毒作用和通過抗原提呈的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)調(diào)節(jié)作用。小膠質(zhì)細(xì)胞除了在病原體引起的中樞神經(jīng)

2、系統(tǒng)疾病中起到保護(hù)性免疫作用外,在慢性或病理性活化的時(shí)候也能引起組織損傷。最新研究顯示CD200-CD200R通路是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)下調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的重要機(jī)制。CD200表達(dá)范圍較廣,主要表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等。其受體為CD200R,主要表達(dá)在單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)(包括巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、肥大細(xì)胞等)和少量的T細(xì)胞上,具有與其配體CD200非常相似的結(jié)構(gòu)。CD200與CD200R結(jié)合觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號級聯(lián)放大

3、的系統(tǒng)功能,控制并下調(diào)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的活化。本實(shí)驗(yàn)用BV2細(xì)胞作為小膠質(zhì)細(xì)胞的替代,PC12細(xì)胞作為神經(jīng)元的替代,小膠質(zhì)細(xì)胞((BV2)分別與受損和正常神經(jīng)元(PC12)共育,及用受損和正常神經(jīng)元的上清液孵育,使小膠質(zhì)細(xì)胞在不同的損傷神經(jīng)環(huán)境中接受刺激后考察其CD200R的表達(dá)情況,來探討活化的小膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元之間的相互作用。
　　 方法：
　　 對數(shù)生長期狀態(tài)良好的PC12細(xì)胞用500nM魚騰酮(Rotenone,

4、RT)處理24h后換新鮮培養(yǎng)液(Conditione Media,CM),BV2分別與正常PC12細(xì)胞、500nM RT處理的PC12細(xì)胞共育培養(yǎng)及正常和損傷的PC12細(xì)胞上清孵育BV2細(xì)胞,正常1640培養(yǎng)液培養(yǎng)BV2細(xì)胞作為正常對照。兩種細(xì)胞的共育培養(yǎng)用轉(zhuǎn)移篩網(wǎng)(孔徑8μm的transwell)間隔。共育培養(yǎng)或孵育24h后收集細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。MTT檢測細(xì)胞活力,倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞CD200R表達(dá),ELISA定量檢測CD200R蛋白

5、表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、BV2細(xì)胞用PC12細(xì)胞正?；蚴軗p上清孵育組細(xì)胞存活率要明顯低于對照組(P<0.05),BV2細(xì)胞與PC12細(xì)胞共育培養(yǎng)組細(xì)胞存活率略高于對照組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)
　　 2、BV2細(xì)胞與500nM RT損傷PC12細(xì)胞共育組CD200R表達(dá)與對照組相比顯著增多(P<0.05),而用受損PC12上清孵育BV2組CD200R表達(dá)與對照組相比顯著減少(P<0.05)。BV2