間充質(zhì)干細(xì)胞種植血管內(nèi)支架促支架再內(nèi)皮化的研究.pdf

1、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈介入(percutaneous coronary inteventional，PCI)是冠心病治療的重要手段，但因術(shù)后損傷反應(yīng)導(dǎo)致的血管內(nèi)再狹窄是困擾介入治療的難題。冠脈內(nèi)支架植入術(shù)的廣泛應(yīng)用使PCI術(shù)后再狹窄率明顯降低，但支架植入又會(huì)引起支架內(nèi)再狹窄(in-stent restenosis，ISR)，其發(fā)生率有13％-20％。國(guó)內(nèi)外針對(duì)ISR的發(fā)生機(jī)制對(duì)支架進(jìn)行了多方面改性和改良，目前防治支架內(nèi)再狹窄的研究熱點(diǎn)在于藥物洗脫

2、性支架。它可以通過(guò)抑制血管內(nèi)膜的增生降低再狹窄率，但是同時(shí)抑制了血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)和血管的再內(nèi)皮化，導(dǎo)致血管內(nèi)皮的愈合延遲，是遲發(fā)血栓形成的主要原因。人們現(xiàn)在普遍認(rèn)為對(duì)支架表面進(jìn)行細(xì)胞修飾可能會(huì)加速支架完全再內(nèi)皮化過(guò)程，促進(jìn)損傷血管愈合，成為解決ISR的一條有效途徑。
　　 近來(lái)的研究熱門之一是把干細(xì)胞被作為主要的種子細(xì)胞，已有大量文獻(xiàn)證實(shí)，MSCs參與了血管內(nèi)膜損傷后的修復(fù)，在損傷內(nèi)膜再內(nèi)皮化過(guò)程中起著重要的作用。在本研究中，

3、我們將采用兔骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)作為種子細(xì)胞，它不僅有著很強(qiáng)的可塑性可以向多種組織和細(xì)胞分化，而且取材方便，易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增，在體內(nèi)植入反應(yīng)弱，在體外連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能。
　　 本文采用全骨髓貼壁法從新西蘭大白兔的骨髓中的分離出MSCs，并在體外進(jìn)行擴(kuò)增純化；選取抗體CD29、CD44、CD34，通過(guò)免疫組化、免疫熒光鑒定分離的MSCs；采用

4、超聲霧化噴涂裝置，在支架表面噴涂均勻的明膠-多聚賴氨酸混合蛋白涂層，掃描電鏡檢測(cè)蛋白涂層在支架上的涂覆情況；利用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)裝置，按照前期研究基礎(chǔ)確定的最佳旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)條件(細(xì)胞種植密度為1×105 cells/ml，旋轉(zhuǎn)時(shí)間為6 h，旋轉(zhuǎn)速度為0.4 rpm，旋轉(zhuǎn)一次)制作細(xì)胞支架，倒置顯微鏡和掃描電鏡檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞在支架表面的粘附及生長(zhǎng)情況；以新西蘭大白兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，于腹主動(dòng)脈植入間充質(zhì)干細(xì)胞支架，316L不銹鋼裸支架、明膠-多聚賴氨酸蛋

5、白涂層支架為對(duì)照組。術(shù)后1周、4周和12周，處死動(dòng)物取下置入的支架血管段，掃描電鏡鑒定其內(nèi)皮化效果。
　　 實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：
　　 ①使用全骨髓貼壁法從新西蘭大白兔體內(nèi)成功分離出較純的MSCs，經(jīng)細(xì)胞免疫化學(xué)和細(xì)胞免疫熒光鑒定，CD29、CD44表達(dá)呈陽(yáng)性，CD34表達(dá)呈陰性，說(shuō)明所分離細(xì)胞為CD29+CD44+CD34-細(xì)胞。
　　 ②采用超聲霧化噴涂裝置噴涂支架，可以得到涂敷均勻、貼附緊密的明膠-多聚賴氨酸

6、混合蛋白涂層；利用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)裝置，按照前期研究基礎(chǔ)確定的最佳旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)條件(胞種植密度為1×105 cells/ml，旋轉(zhuǎn)時(shí)間為6 h，旋轉(zhuǎn)速度為0.4 rpm，旋轉(zhuǎn)一次)制備MSCs修飾的血管內(nèi)支架，結(jié)果顯示MSCs完全覆蓋于支架表面，呈鋪展?fàn)睿?xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，并且持續(xù)生長(zhǎng)。
　　 ③動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MSCs修飾的血管內(nèi)支架，316L不銹鋼裸支架、明膠-多聚賴氨酸蛋白涂層支架為對(duì)照組，結(jié)果顯示MSCs修飾的血管內(nèi)支架在植入動(dòng)物1個(gè)月