血管內(nèi)皮前體細胞對間充質(zhì)干細胞增殖能力的影響.pdf

1、目的:探索同時從 C57BL/6小鼠骨髓分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞(MSCs)與內(nèi)皮前體細胞(EPCs)并對其鑒定的方法,并探討 EPCs條件培養(yǎng)基及 EPCs在非接觸共培養(yǎng)體系里對 MSCs增殖的影響。
　　方法:1.小鼠骨髓細胞經(jīng)改良差時貼壁法分離，以48 h為時間點，48 h內(nèi)貼壁細胞傳至3代后行成骨、成軟骨、成脂分化誘導(dǎo)實驗，流式細胞術(shù)（FCM）檢測其表面標(biāo)記；48 h后收集未貼壁細胞，傳至3代后行血管形成實驗，傳至5代后行 C

2、D31免疫熒光細胞染色實驗，F(xiàn)CM檢測其表面標(biāo)記。
　　2.將 MSCs分為0 EPC-CM組（采用 LG-DMEM培養(yǎng)）、50％ EPC-CM組（采用50% EPC-CM+50% LG-DMEM培養(yǎng)）和100% EPC-CM組（采用100%EPC-CM培養(yǎng)）。
　　3.取第3代 MSCs和 EPCs,按1:1的細胞比例接種入 Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)中,以下室接種 MSCs，上室接種 EPCs為實驗組。同時設(shè)置相同密度

3、單純MSCs接種于下室為對照組。采用 MTT比色法和 EdU熒光標(biāo)記法檢測 MSCs對 EPCs增殖能力的影響。
　　結(jié)果:1.FCM檢測第3代 MSCs高表達 Sca-1、CD29，低表達 CD45、CD11b；經(jīng)誘導(dǎo)可向成骨、成軟骨、成脂方向分化。FCM檢測第3代 EPCs高表達 CD34、CD133和 VEGFR2；在鋪有基質(zhì)膠的96孔培養(yǎng)板中可形成血管樣結(jié)構(gòu)。第5代48 h后貼壁細胞特異性表面抗原 CD31呈陽性表達。

4、r>　　2.MTT比色法結(jié)果顯示與對照組相比較，50% EPC-CM組和100% EPC-CM組 MSCs增殖能力明顯增強,且呈濃度依賴性(P＜0.05)。
　　3.MTT比色法和 EdU熒光標(biāo)記法結(jié)果顯示與對照組相比較，實驗組 MSCs的增殖能力在72 h后顯著增強( P＜0.05)；處于 DNA合成期的細胞比例也顯著增多( P＜0.01)。
　　結(jié)論:利用差速貼壁法可同時分離純化擴增 MSCs和 EPCs，EPC-CM能