Sonazoid超聲造影診斷肝纖維化-硬化的實驗研究.pdf

1、本文對Sonazoid超聲造影診斷肝纖維化/硬化進行了實驗研究。本文分為兩個部分：
　　 第一部分：大鼠Kupffer細(xì)胞培養(yǎng)系內(nèi)超聲輻照下Sonazoid微泡的動態(tài)現(xiàn)象。
　　 目的：驗證Kupffer細(xì)胞對Sonazoid微泡的吞噬，探討超聲輻照的條件對微泡運動和形態(tài)的影響作用以及對細(xì)胞的安全性。
　　 方法：鏈霉蛋白酶和膠原酶法分離大鼠Kupffer細(xì)胞并體外培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞對Sonazoid

2、微泡的吞噬。用臨床超聲檢查儀，觀測在不同聲壓和幀頻條件的超聲輻照下Sonazoid微泡在Kupffer細(xì)胞系內(nèi)的動態(tài)現(xiàn)象。用水聽器測量產(chǎn)生微泡各種現(xiàn)象的聲壓及其閾值。檢測因輻照微泡破裂對細(xì)胞的損傷。
　　 結(jié)果：分離Kupffer細(xì)胞活性大于90％，細(xì)胞純度95％以上。鏡下可見Kupffer培養(yǎng)細(xì)胞對Sonazoid微泡的吞噬，吞噬率91％。微泡與細(xì)胞的關(guān)系呈現(xiàn)游離、黏附和被吞噬三種狀態(tài)。在頻率3.5MHz、幀頻15Hz的超聲輻

3、照下，游離微泡在超聲機械指數(shù)(Mechnical Index，MI)0.21時由靜止出現(xiàn)震動，產(chǎn)生震動現(xiàn)象的最佳聲壓范圍為MI=0.21-0.44；MI=0.53時微泡的移動現(xiàn)象最明顯；MI=0.75時絕大多數(shù)微泡出現(xiàn)壓縮現(xiàn)象；導(dǎo)致微泡破裂的聲壓閾值是MI=1.03。黏附微泡在MI=0.53時從細(xì)胞表面脫離，MI=1.03時微泡的壓縮現(xiàn)象達(dá)到峰值，MI=1.18是微泡破裂的聲壓閾值。被吞噬微泡在MI=1.18時出現(xiàn)壓縮現(xiàn)象，發(fā)生破裂的閡

4、值為MI=1.37。在輻照頻率相同、幀頻1Hz的條件下，需要采用更高的聲壓使微泡發(fā)生上述現(xiàn)象。黏附微泡和吞噬微泡在高聲壓下破裂后未發(fā)現(xiàn)相關(guān)的細(xì)胞損傷。超聲儀器所顯示的機械指數(shù)與水聽器測得的實際聲壓呈線性相關(guān)。
　　 結(jié)論：Kupffer細(xì)胞對Sonazoid微泡存在高度吞噬現(xiàn)象。超聲輻照的條件(聲壓、幀頻)對微泡的運動(靜止、震動和移動)和微泡的形態(tài)(壓縮、破裂)有明顯的影響作用，但未見并發(fā)細(xì)胞損傷。
　　 第二部分：S

5、onazoid超聲造影診斷肝纖維化/硬化的動物實驗。
　　 目的：探討活體Sonazoid超聲造影(Contrast-enhanced Ultrasound，CEUS)診斷肝纖維化/硬化的可行性和建立相應(yīng)的方法。
　　 方法：口服四氯化碳法制作大鼠肝纖維化/硬化模型。對實驗動物行常規(guī)超聲檢查后，經(jīng)周圍靜脈先后注射超聲造影劑SonoVue和Sonazoid行CEUS檢查。分析常規(guī)超聲圖像和Sonazoid-CEUS Kup

6、ffer期增強圖像并行診斷性試驗。采用高級動態(tài)血流成像(ADF成像)觀察Sonazoid-CEUSKupffer期增強表現(xiàn)。采用Imagelab軟件定量測量Sonazoid-CEUSKupffer期增強水平及描繪時間強度曲線，并行診斷性試驗。
　　 結(jié)果：肝纖維化/硬化模型制作成功率100％，死亡率12.5％。24只大鼠進入超聲檢查，按病理診斷分為正常肝臟組(n=5)、肝纖維化組(n=6)和肝硬化組(n=13)。常規(guī)超聲檢查根據(jù)

7、肝臟形態(tài)改變和脾大、腹水等表現(xiàn)，診斷肝纖維化/硬化的敏感性63.2％(12/19)，特異性100％(5/5)，陽性預(yù)測值100％(12/12)，陰性預(yù)測值41.7％(5/12)，準(zhǔn)確率70.8％(17/24)。兩種造影劑的CEUS動脈期和門脈期表現(xiàn)基本一致。注射造影劑5分鐘后SonoVue-CEUS上的增強顯像基本消失，Sonazoid-CEUS繼續(xù)顯影進入Kupffer期，從此期開始至注射造影劑后10分鐘時，增強圖像表現(xiàn)為：肝臟增強水

8、平正常肝臟組高于肝纖維化組和肝硬化組，肝臟與脾臟增強水平的差異正常肝臟組小于肝纖維化組和肝硬化組。這種增強特征得到ADF成像的佐證。根據(jù)Sonazoid-CEUS Kupffer期肝實質(zhì)增強水平的高低和肝臟與脾臟增強水平差異的大小診斷肝纖維化/硬化的敏感性84.2％(16/19)，特異性100％(5/5)，陽性預(yù)測值100％(16/16)，陰性預(yù)測值62.5％(5/8)，準(zhǔn)確率87.5％(21/24)，顯著優(yōu)于常規(guī)超聲診斷(P=0.01

9、7)。定量測量進一步顯示，10分鐘時肝實質(zhì)增強水平以正常肝臟組最高，肝纖維化組次之，肝硬化組最低，三組間差異顯著(P=0.045，P=0.002，P=0.035)；肝脾增強水平的差異以正常肝臟組最小，肝纖維化組居中，肝硬化組最大，后者與前兩組之間有顯著性差異(P=0.009，P=0.016)。以Kupffer期肝實質(zhì)增強水平≥-40dB或肝脾差異≤3dB診斷為正常肝臟、-42dB≤肝臟增強水平＜-40dB或3dB＜肝脾差異≤5dB診斷為

10、肝纖維化和肝臟實質(zhì)增強水平＜-42dB或肝脾差異＞5dB診斷為肝硬化，對正常肝，肝纖維化和肝硬化診斷的敏感性分別為100％(5/5)，100％(6/6)和84.6％(11/13)；特異性73.7％(14/19)，72.2％(13/18)和63.6％(7/11)；陽性預(yù)測值50％(5/10)，54.5％(6/11)和73.7％(11/15)；陰性預(yù)測值100％(14/14)，100％(13/13)和77.8％(7/9)；準(zhǔn)確率79.2％(