幽門螺旋桿菌UreB基因克隆及其轉(zhuǎn)植物研究.pdf

1、幽門螺旋桿菌(Helicobacterpylori,簡(jiǎn)稱Hp)感染了世界上一半以上的人口.已證實(shí)Hp感染是慢性胃炎和消化性潰瘍的重要病因,與胃癌和胃MALT淋巴瘤的發(fā)病也有密切關(guān)系.現(xiàn)有根除Hp的手段主要是聯(lián)合應(yīng)用抗生素,但由于該菌感染的普遍性、耐藥菌株的不斷增加、較高的花費(fèi)以及病人的低依從性等,限制了抗菌藥物的療效,進(jìn)行免疫防治研究十分迫切.有研究表明尿素酶B亞單位(UreB)可以刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答且具有較好的免疫保護(hù)性.該研究克隆

2、幽門螺旋桿菌UreB基因,通過根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導(dǎo)轉(zhuǎn)化煙草、水稻和草莓,獲得以下結(jié)果:1.利用PCR技術(shù)從浙江臨床幽門螺旋桿菌菌株總DNA中擴(kuò)增出UreB結(jié)構(gòu)基因,通過定向克隆的方法插入克隆載體pGEM-7zf(+)中.對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行基因序列測(cè)定,并通過Genedoc 3.2軟件進(jìn)行序列分析和比較.在此基礎(chǔ)上構(gòu)建重組表達(dá)載體pBI-UreB和pCA-UreB,將UreB基因置于CaMV 3

3、5S啟動(dòng)子控制之下.2.以煙草葉盤為材料,通過根癌農(nóng)桿菌EHA105的介導(dǎo),將pBI-UreB質(zhì)粒導(dǎo)入煙草葉片組織中,通過兩輪抗性篩選,得到抗卡那霉素(Kan)的再生植株.對(duì)所得24株再生苗進(jìn)行PCR檢測(cè),表明陽(yáng)性苗比例為66%.PCR-Southern結(jié)果進(jìn)一步證明目的基因確已整合到煙草基因組中.Western-blot結(jié)果顯示UreB蛋白已經(jīng)在部分煙草中得到表達(dá).3.以水稻成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織為材料,通過根癌農(nóng)桿菌EHA105的介導(dǎo)