NK92-MI細(xì)胞表面SP受體功能表達(dá)的研究.pdf

1、P物質(zhì)(Substance P，SP)是神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)反應(yīng)時分泌的一種生物活性多肽，廣泛分布于細(xì)的初級傳入神經(jīng)纖維內(nèi)。軀體和精神刺激作用于神經(jīng)系統(tǒng)時，既可通過神經(jīng)的直接作用影響免疫系統(tǒng)的功能活動，也可通過釋放內(nèi)分泌激素或其它細(xì)胞因子對免疫功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，而經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)肽則是直接作用于免疫活性細(xì)胞和其他參與免疫反應(yīng)細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)。前期的研究發(fā)現(xiàn)SP的生物活性是通過與SP受體發(fā)生作用而實(shí)現(xiàn)的。許多免疫細(xì)胞膜上存在有SP的特異性受體[

2、3]。這些形態(tài)學(xué)資料為SP參與免疫調(diào)節(jié)提供了證據(jù)。一些免疫細(xì)胞也能夠產(chǎn)生SP，并以自分泌或/和旁分泌的方式調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能。 目的： NK細(xì)胞是天然免疫系統(tǒng)中一類十分重要的淋巴細(xì)胞，在機(jī)體抗感染、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)及造血系統(tǒng)等方面發(fā)揮重要作用。NK細(xì)胞通過細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒殺傷非己細(xì)胞，并通過釋放多種細(xì)胞因子(如IFN，GM—CSF和TNF)和趨化因子調(diào)節(jié)天然免疫和獲得性免疫。NK細(xì)胞表面有多種活化性受體，但是有關(guān)SP調(diào)節(jié)NK細(xì)胞

3、功能是通過何種受體途徑報(bào)道較少。為此，本文檢測了SP對NK—1受體表達(dá)變化的影響以及NK—1受體阻斷劑作用后的NK細(xì)胞增殖和殺傷活性的變化，以研究SP影響NK細(xì)胞功能的可能作用機(jī)制。 方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)和處理，收集對數(shù)期細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組加NK—1受體阻斷劑預(yù)處理后與對照組分別加不同濃度P物質(zhì)培養(yǎng)NK92—MI細(xì)胞24h。2、MTT法檢測NK—1受體阻斷劑作用前后不同濃度SP(10-14mol/L，10-12mol/L，10-10mo

4、l/L，10-8mol/L，10-6mol/L，10-4mol/L)對NK92—MI細(xì)胞增殖的影響。3、MTT釋放法測定NK—1受體阻斷劑作用前后不同濃度P物質(zhì)對NK92—MI細(xì)胞殺傷活性的影響。4、RT-PCR檢測比較NK—1受體和NK—2受體mRNA表達(dá)水平。5、流式細(xì)胞術(shù)檢測比較NK92—MI細(xì)胞表面SP受體的膜表達(dá)情況。 結(jié)果：1、當(dāng)濃度為10-10M、10-8M、10-6M時，SP對NK92—MI細(xì)胞增殖有明顯促進(jìn)作用

5、(P<0.05)。10-10M時SP對NK92—MI細(xì)胞增殖促進(jìn)作用更為顯著，(P<0.01)。10-7M濃度的NK—1受體阻斷劑能完全阻斷10-10M、10-8M、10-6M濃度的SP對NK92MI細(xì)胞的增殖促進(jìn)作用。2、效靶比為4：1時，10-14M～10-8M濃度的SP對NK92—MI細(xì)胞殺傷活性有增強(qiáng)作用；低濃度10-14M較高濃度10-8M殺傷作用明顯。10-7M的NK—1受體阻斷劑能部分阻斷SP對NK92—MI細(xì)胞殺傷活性的

6、增強(qiáng)作用，但是與對照組比較差異無顯著性。3、RT-PCR方法檢測到NK92—MI細(xì)胞中有NK1受體mRNA的表達(dá)，且10-10M，10-8M，10-6M濃度的SP使NK92—MI細(xì)胞中NK1受體mRNA的表達(dá)增強(qiáng)，與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)；RT-PCR方法未檢測到NK92—MI細(xì)胞中有NK2受體m RNA的表達(dá)。4、SP與NK92—MI細(xì)胞共孵育24 h，F(xiàn)CAS檢測結(jié)果表明，NK—1受體在10-10M～10.6M濃度S

7、P作用下表達(dá)增強(qiáng)。 結(jié)論：NK92—MI細(xì)胞上有NK—1受體的表達(dá)，且一定濃度SP能誘導(dǎo)其表達(dá)上調(diào)。一定濃度范圍的SP對NK92—MI細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用，其中10-10M濃度時促進(jìn)增殖作用最強(qiáng)；應(yīng)用NK—1受體阻斷劑可以完全阻斷一定濃度范圍的SP對NK92—MI細(xì)胞的促增殖作用。一定濃度的SP能夠增強(qiáng)NK92—MI細(xì)胞的殺傷活性。10-14M、10-12M、10-10M濃度的SP能夠明顯增強(qiáng)NK92—MI細(xì)胞殺傷作用。應(yīng)用NK