靶向4-1BBL基因siRNA抑制HL-60細胞生長的體外研究.pdf

1、目的：觀察4-1BBLsiRNA對HL-60細胞生長誘導凋亡作用，以及細胞因子分泌的影響；對比觀察4-1BBL被干擾前后HL-60細胞培養(yǎng)上清液對淋巴細胞增殖、凋亡誘導作用的影響，進一步揭示腫瘤的免疫逃逸機制。
　　方法：采用化學合成法人工合成靶向人4-1BBL基因的siRNA，脂質體轉染法轉染HL-60細胞；半定量RT-PCR和流式細胞術檢測干擾前后HL-60細胞4-1BBLmRNA和表面蛋白的表達水平；MTT法檢測4-1BBL

2、被干擾后對HL-60細胞增殖作用的影響；流式細胞術檢測基因干擾后對HL-60細胞凋亡的影響；流式細胞術檢測4-1BBL干擾前后HL-60細胞內TGF-β表達水平；ELISA法檢測4-1BBL干擾前后HL-60細胞培養(yǎng)上清TGF-β、VEGF分泌水平。密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，收集4-1BBL干擾后的HL-60細胞培養(yǎng)上清液與體外分離的人淋巴細胞共培養(yǎng)， MTT法檢測機體淋巴細胞增殖水平；流式細胞術檢測淋巴細胞凋亡比率的變化。<

3、br>　　結果：靶向4-1BBLsiRNA轉染HL-60后，4-1BBLmRNA和蛋白的表達水平明顯降低；細胞增殖被抑制，其抑制作用在轉染48 h最明顯，增生抑制率達到（22.14±2.3）％；細胞凋亡率增加，由（9.8±2.5）%上升到（32.5±5.1）%；4-BBLsiRNA能降低HL-60細胞分泌TGF-β，使TGF-β從（76.13±4.59）%下降到（65.57±5.15）%（P＜0.05)；ELISA結果顯示，4-1BBL

4、基因被干擾后，HL-60細胞培養(yǎng)上清中TGF-β和VEGF分泌水平明顯降低（P<0.05）。與干擾前相比，干擾后的HL-60細胞培養(yǎng)上清液對機體淋巴細胞的增殖抑制和誘導凋亡作用下降
　　結論：化學合成的siRNA在體外能成功抑制靶基因4-1BBL的表達、HL-60細胞的增殖和細胞因子TGF-β和VEGF的分泌，并有助于細胞趨向凋亡；HL-60細胞高表達的4-1BBL信號具有反向調節(jié)作用，它能促進腫瘤細胞自身增殖、抑制其凋亡并能促進