乏氧-輻射雙敏感啟動(dòng)子載體的構(gòu)建及乏氧和輻射誘導(dǎo)下調(diào)控HSVtk基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞的殺傷作用.pdf

1、 本文主要探討了乏氧-輻射雙敏感啟動(dòng)子載體的構(gòu)建及乏氧和輻射誘導(dǎo)下調(diào)控HSVtk基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞的殺傷作用，分為兩部分進(jìn)行論述。第一部分利用乏氧應(yīng)答元件和放射敏感性調(diào)控序列與治療基因相耦聯(lián)，在腫瘤受照射時(shí)誘導(dǎo)治療基因僅在腫瘤內(nèi)表達(dá)，以提高治療比率，并擬構(gòu)建乏氧-輻射雙敏感性啟動(dòng)子載體，以進(jìn)一步提高肺癌放射-基因治療效果。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，構(gòu)建了成功包含HREs和CArG元件的融合性基因啟動(dòng)子，為進(jìn)一步研究放射-基因治療奠定了基礎(chǔ)。為觀察乏氧

2、及射線照射時(shí)包含HREs和CArG元件的乏氧-輻射融合啟動(dòng)子誘導(dǎo)增強(qiáng)的綠色熒光蛋白(EGFP)在SPCA1和A549肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)變化，第二部分進(jìn)行了乏氧-輻射雙敏感性啟動(dòng)子調(diào)控EGFP基因?qū)Ψρ鹾蜕渚€照射應(yīng)答的研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，我們構(gòu)建的融合性啟動(dòng)子載體，既對射線照射敏感，也對乏氧應(yīng)答，乏氧及照射后能誘導(dǎo)下游的EGFP大量表達(dá)，包含乏氧-輻射融合性啟動(dòng)子的pDNA.HRE.CArG.miniCMV.EGFP質(zhì)粒對乏氧照射的應(yīng)答性最

3、強(qiáng)。第三部分為了探討乏氧-輻射敏感性啟動(dòng)子調(diào)控HSVtk基因表達(dá)對肺癌細(xì)胞的殺傷作用，將放療與乏氧-輻射敏感性啟動(dòng)子調(diào)控的基因?qū)虻拿?前體藥物療法聯(lián)合，進(jìn)行肺癌的自殺基因放射導(dǎo)向治療，以期探索肺癌治療的新途徑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，我們構(gòu)建的包含乏氧-輻射融合性啟動(dòng)子和HSVtk基因的載體能感受乏氧和射線照射的刺激，乏氧及射線照射后能誘導(dǎo)下游的HSVtk基因大量表達(dá)，顯著提高SPCA1和A549細(xì)胞對GCV的敏感性，增加HSVtk基因?qū)PCA1