甘蔗己糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因啟動(dòng)子pPST2a的功能研究.pdf

1、啟動(dòng)子是基因表達(dá)調(diào)控的重要元件。在轉(zhuǎn)基因植物中,啟動(dòng)子是影響轉(zhuǎn)基因表達(dá)效率的重要因素之一,選擇高效率的啟動(dòng)子是高效率表達(dá)外源基因的關(guān)鍵。組成型啟動(dòng)子,在轉(zhuǎn)基因植物的研究中得到了廣泛運(yùn)用。但是組成型啟動(dòng)子不能從時(shí)間和空間上有效地調(diào)控目的基因的表達(dá),在作物的遺傳改良中存在一定的缺陷。組織特異啟動(dòng)子作為一類專一性啟動(dòng)子,能指導(dǎo)外源基因在植物發(fā)育過(guò)程中某一特定時(shí)空表達(dá),它不僅能使目的基因的表達(dá)產(chǎn)物在一定空間積累,增加區(qū)域表達(dá)量,避免植物營(yíng)養(yǎng)的浪

2、費(fèi)。因此,尋找一個(gè)在甘蔗中高效表達(dá)或者特異的啟動(dòng)子,對(duì)甘蔗遺傳改良有重要義。
　　 本實(shí)驗(yàn)室克隆了甘蔗己糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因PST2a基因5'上游1968bp的啟動(dòng)子序列,命名為pPST2a。為了進(jìn)一步鑒定它的功能,我們構(gòu)建了它一系列的缺失表達(dá)載體:pCBI1900、pCBI1600、pCBI1300、pCBI1100;又通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)甘蔗進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化并獲得一批轉(zhuǎn)化植株;對(duì)這些轉(zhuǎn)化植株分別進(jìn)行了GUS基因的PCR檢測(cè),證實(shí)獲得轉(zhuǎn)

3、pCBI1900、pCBI1600、pCBI1300和pCBI1100的陽(yáng)性植株分別為16、33、29、和21株;從每個(gè)載體獲得的轉(zhuǎn)基因植株中,選出生長(zhǎng)良好的,進(jìn)行根、莖、葉、葉芽、葉鞘、五個(gè)部位的GUS基因表達(dá)的檢測(cè)(GUS組織化學(xué)染色定位法),證明GUS基因在轉(zhuǎn)pCBI1900、pCBI1600和pCBI1300植株中的根部均有表達(dá),而其余部位未見其表達(dá);轉(zhuǎn)pCBI1100植株中,任何部位均沒有表達(dá);證明了pCBI1900、pCBI