脂氧素A4誘導(dǎo)HO-1改善炎癥性肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的研究.pdf

1、目的:
　　觀察脂氧素A4(LXA4)誘導(dǎo)血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)表達(dá)對(duì)腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor a，TNF-α）引起人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human pulmonary microvascular endothelia cells，HPMEC)炎癥損傷的保護(hù)作用及相關(guān)通路PI3K/Akt影響的機(jī)制。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)分為兩部分:
　　(

2、1)針對(duì)LXA4誘導(dǎo)HO-1表達(dá)的通路研究，實(shí)驗(yàn)分組為:對(duì)照組、LXA4(50ng/mL)處理組、抑制劑(LXA450ng/mL+LY29400220μ M)干預(yù)組、激動(dòng)劑組(IGF-150ng/mL)。蛋白質(zhì)免疫印跡(WesternBlotting)對(duì)PI3K/Akt通路中關(guān)鍵蛋白p-Akt、Akt，HO-1及其調(diào)控關(guān)鍵蛋白p-Nrf2、Nrf2、Keap1、核內(nèi)Nrf2進(jìn)行定量檢測(cè)，細(xì)胞免疫熒光對(duì)Nrf2核內(nèi)外表達(dá)進(jìn)行定位檢測(cè);

3、r>　　(2)針對(duì)LXA4對(duì)炎癥損傷的保護(hù)作用的研究，實(shí)驗(yàn)分組為:對(duì)照組、TNF-a刺激組(50ng/mL)、LXA4干預(yù)組(TNF-a50ng/mL+LXA450ng/mL)、抑制劑組(Znpp-IX0.5μ M預(yù)處理12H，TNF-a50ng/mL+LXA450ng/mL)。通過(guò)BCECF/AM熒光標(biāo)記THP-1細(xì)胞對(duì)HPMEC黏附性進(jìn)行檢測(cè)分析，通過(guò)JC-1線粒體膜電位試劑盒對(duì)HPMEC線粒體膜電位進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果:

4、r>　　(1)LXA4引起HO-1蛋白表達(dá)增高呈劑量相關(guān)性，且在50ng/ml時(shí)差異顯著;
　　(2)LXA4通過(guò)激活PI3K/Akt通路引起Nrf2磷酸化，同時(shí)LXA4引起Keap1構(gòu)型該表，導(dǎo)致Nrf2與Keap1聚合體解聚，Nrf2轉(zhuǎn)入核內(nèi)與ARE結(jié)合域結(jié)合，上調(diào)HO-1表達(dá)，對(duì)細(xì)胞起保護(hù)作用;
　　(3)LXA4通過(guò)HO-1逆轉(zhuǎn)TNF-α導(dǎo)致線粒體膜電位改變減輕HPMEC細(xì)胞凋亡水平發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用;
　　(4