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1、目的：研究apelin-13通過PKC和14-3-3蛋白對(duì)大鼠VSMCs增殖和磷酸化ERK1/2的影響以及14-3-3與Raf-1之間的相互結(jié)合作用，探討apelin-APJ系統(tǒng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。 方法：組織貼塊法培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈VSMCs；IF明確VSMCs中apelin和APJ受體的定位；WB檢測(cè)14-3-3、pRaf-1、pERK1/2、ERK1/2、CyclinD1、CyclinE和Caveolin-1的表達(dá)；MTT觀察G
2、F109203X和Difopein對(duì)apelin-13促VSMCs增殖的影響；IP檢測(cè)14-3-3和Raf-1等多蛋白高分子量復(fù)合物的形成。 結(jié)果：WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，apelin-13 （0、0.5、1、2、4μM）濃度依賴性刺激大鼠VSMCs 14-3-3、pRaf-1和pERK1/2表達(dá)增加，以2μM最為明顯；2μM apelin-13刺激大鼠VSMCs 14-3-3、pRaf-1和pERK1/2表達(dá)呈時(shí)間依賴性改變，在4h
3、增加最為顯著。PKC阻斷劑GF109203X和14-3-3蛋白抑制劑Difopein明顯抑制apelin-13誘導(dǎo)的14-3-3、pRaf-1、pERK1/2、CyclinD1及CyclinE表達(dá)，而且明顯減弱了apelin-13對(duì)Caveolin-1表達(dá)的抑制作用，Caveolin-1表達(dá)增加并與pERK1/2呈負(fù)相關(guān)。MTT法顯示GF109203X與Difopein明顯抑制apelin-13誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖。IP發(fā)現(xiàn)apelin-13
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