重組人p53腺病毒聯(lián)合順鉑對人卵巢癌鉑類耐藥細胞COC1-DDP的敏感性分析及相關機制研究.pdf

1、背景和目的：
　　目前，對化療藥物耐藥仍然是卵巢癌治療失敗的主要原因。在順鉑聯(lián)合紫杉醇的基礎方案上添加新的二線化療藥物，耐藥或復發(fā)患者的響應率只有不到30％。另外，隨之增加的藥物毒性反應及不良反應致使患者的耐受性和依從性均降低。由此，針對耐藥基因的靶向治療就凸顯優(yōu)勢。由于近80％的卵巢癌患者存在p53基因的突變，所以大部分的基因治療都聚焦于腫瘤抑癌基因p53。但是使用基因轉(zhuǎn)導技術將野生型p53再次導入腫瘤細胞后，攜帶野生型p53的

2、腫瘤細胞和突變型p53的腫瘤細胞哪個凋亡更明顯，國內(nèi)外的研究結(jié)果似乎并不一致，也有研究報道p53的基因治療與細胞內(nèi)p53的狀態(tài)無關。近期有研究認為關于耐藥的基因診斷有可能預測預后，但單獨的分子靶向治療或許不足以改善晚期卵巢癌患者的預后。本實驗在不考慮p53狀態(tài)的情況下，利用重組人p53腺病毒(rAd-p53)聯(lián)合順鉑作用于人卵巢癌鉑類耐藥細胞系COC1/DDP，觀察其對耐藥細胞生長的影響。
　　p73是p53家族成員之一，2個不同

3、的啟動子轉(zhuǎn)錄生成促凋亡的TAp73和抗凋亡的ΔTAp73亞型，不同亞型在細胞中的表達比決定了細胞生死命運?，F(xiàn)已證實顯性負性的ΔNp73亞型與腫瘤的化療耐藥密切相關，并能通過反饋回路抑制野生型p53和TAp73的促凋亡作用。本研究從基因水平使用熒光定量PCR技術檢測了rAd-p53、順鉑及聯(lián)合用藥作用下p73的所有N端亞型表達情況，探討各亞型在耐藥人卵巢癌細胞凋亡中的作用。
　　方法：
　　將人卵巢癌鉑類耐藥細胞COC1/DD

4、P分成4組培養(yǎng):對照組（不加藥）;rAd-P53組(MOI400);順鉑組(12ug/ml);聯(lián)合用藥組(順鉑12ug/ml+rAd-p53400MOI)。MTT法測定不同濃度梯度下順鉑及rAd-p53對COC1/DDP細胞的A570值，比較不同處理組的細胞生長抑制率。流式細胞術檢測各組細胞的凋亡率。使用熒光定量PCR技術半定量檢測不同處理組p73所有N端亞型mRNA的相對表達量。
　　結(jié)果：
　　(1)順鉑組、rAd-p5

5、3組、聯(lián)合用藥組24小時細胞抑制率分別是46.21±6.31％、13.48±2.49％、64.80±6.15％，差異有統(tǒng)計學意義(F=217.328，P=0.000)，兩兩比較結(jié)果顯示各組間的差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　(2)聯(lián)合用藥組、順鉑組、rAd-p53組及對照組12小時細胞凋亡率分別為19.55±1.13％、14.96±1.80％、7.71±1.46％、6.23±0.98％，差異有統(tǒng)計學意義(F=61.688

6、，P=0.000)。兩兩比較結(jié)果:聯(lián)合用藥組與單藥組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而rAd-p53組與未加藥組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　(3)熒光定量PCR結(jié)果:不同處理組中野生型p53的mRNA相對表達量均升高，但只有順鉑組和rAd-p53組與對照組間的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　順鉑處理組中TAp73和Ex2/3p73的相對表達量升高(P＜0.05)，而ΔNp73的表達下調(diào)(P＜

7、0.05)。ΔN'p73和Ex2p73的表達上調(diào)，與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　rAd-p53組中5種亞型的相對表達量均升高。除了Ex2p73，其余4種亞型與未加藥組間的差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　聯(lián)合用藥組中ΔN'p73的相對表達量較對照組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其余4種亞型的相對表達量與未加藥組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)