牛泡沫病毒Bet蛋白對病毒復(fù)制抑制機制的研究.pdf

1、泡沫病毒(Fomay virus，F(xiàn)V)屬在分類上歸于反轉(zhuǎn)錄病毒科泡沫病毒亞科，它們能在多種動物中產(chǎn)生持續(xù)性感染。但至今沒有其引發(fā)疾病的報道。該屬病毒具有復(fù)雜的基因組結(jié)構(gòu)和獨特的基因表達調(diào)節(jié)過程，與傳統(tǒng)的反轉(zhuǎn)錄病毒區(qū)別較大。它的基因轉(zhuǎn)錄受到兩個啟動子的調(diào)節(jié)，其中位于5’端的LTR(longterminal repest)負責(zé)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，位于env基因內(nèi)部的啟動子IP(internalpromoter)則調(diào)節(jié)反式激活因子(transa

2、ctivator of spmavirus，Tas)等非結(jié)構(gòu)蛋白的合成。Tas蛋白作為病毒的反式激活因子，可以通過直接結(jié)合在這兩個啟動子上激活下游基因表達。Bet則是存在于病毒復(fù)制過程中，受IP調(diào)節(jié)的另一個非結(jié)構(gòu)蛋白。本室主要研究牛的泡沫病毒(bovine fomay virus，BFV)，本文即是對BFV Bet蛋白在病毒復(fù)制過程中的功能及其作用機制進行深入的研究。
　　 在本文中，發(fā)現(xiàn)Bet蛋白可以抑制BFV的復(fù)制，并對其作

3、用的主要機制進行了研究探討。主要獲得了以下幾個層面的結(jié)果：
　　 1)報告系統(tǒng)層次，利用熒光素酶報告系統(tǒng)，證明了Bet可以抑制BTas對病毒LTR和IP兩個啟動子的激活，并且證明這種抑制呈劑量依賴性。
　　 2)分子機制層次，本文對Bet抑制BTas反式激活LTR的機制進行了研究，通過GST-pull down和CO—IP實驗證明了BTas和Bet有直接的相互作用，并且利用凝膠遷移率阻滯實驗(electrophoreti

4、cmobility shift assay，EMSA)證明了Bet和BTas都同LTR有直接的相互作用，且Bet通過結(jié)合在LTR上行使抑制功能。
　　 3)作用精確序列確定，找出了和Bet抑制BTas反式激活的兩段DNA序列，并發(fā)現(xiàn)這兩段DINA序列在抑制作用中起不同的作用。其中LTR(613—635)同時被BTas和Bet結(jié)合，Bet通過和BTas競爭而起到抑制作用，LTR(635—654)只被Bet結(jié)合，它通過空間位阻的方式