1.小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向子宮內(nèi)膜腺上皮分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究;2.tp53單核苷酸多態(tài)性rs1042522與絨癌的相關(guān)性研究

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文1.小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向子宮內(nèi)膜腺上皮分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究2.TP53單核苷酸多態(tài)性rs1042522與絨癌的相關(guān)性研究姓名：叢青申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：徐叢劍2012-03-21復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文一小鼠骨髓間充質(zhì)千細胞向子宮內(nèi)膜腺上皮分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究 中文摘要們設(shè)想子宮內(nèi)膜腺上皮來源于骨髓來源干細胞中的間充質(zhì)干細胞，若體外能夠?qū)⒐撬栝g充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)為子宮內(nèi)膜腺上皮，將具有極大的臨床治療意義

2、。在此基礎(chǔ)上，課題組開展了體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞( B M S C s ) 向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化的研究，體外將B M S C s 與子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞( E S t C s ) 間接共培養(yǎng)，r e a l t i m eR T - P C R 檢測上皮方面標(biāo)記物角蛋白7 、1 8 、1 9 、上皮膜抗原顯著增加，免疫熒光進一步驗證共培養(yǎng)后角蛋白顯著增加，表明骨髓間充質(zhì)干細胞在體外共培養(yǎng)體系下可以向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化。為進一步研究

3、B M S C s 向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化過程發(fā)生的一系列重要蛋白質(zhì)分子及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路變化，故對誘導(dǎo)前后的B M S C s 、子宮內(nèi)膜腺上皮行同位素標(biāo)記相對和絕對定量( i s o b a r i c t a g sf o r r e l a t i v ea n d a b s o l u t eq u a n t i t a t i o n ，i T R A Q ) 蛋白質(zhì)組學(xué)分析，以獲得這一分化過程的重要蛋白分子及信號通路變化

4、信息。本課題具體分為以下三部分。第一部分，為獲取足量的未分化、分化B M S C s 、子宮內(nèi)膜腺上皮以行蛋白質(zhì)組學(xué)分析、比較，我們原代培養(yǎng)并鑒定小鼠B M S C s 和E S t C s ，建立了兩種細胞的共培養(yǎng)體系促使B M S C s 向子宮內(nèi)膜腺上皮分化，并采用激光捕獲顯微切割技術(shù)獲取足量小鼠子宮內(nèi)膜腺上皮，提取五組樣品的蛋白，調(diào)整五組蛋白量后上機行i T R A Q 蛋白質(zhì)組學(xué)檢測，并通過數(shù)據(jù)庫查找信息，明確2 0 8 種蛋

5、白名稱及其相對定量，為探尋B M S C s 向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化的差異蛋白分子及相關(guān)信號通路分析提供堅實的基礎(chǔ)。第二部分，選取蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定結(jié)果中上皮細胞和間質(zhì)細胞標(biāo)記進行w e s t e r nb l o t 檢測，在對蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定結(jié)果進行驗證的同時，進一步說明B M S C s向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化。驗證結(jié)果表明大部分組學(xué)結(jié)果可靠，并通過進一步驗證隨共培養(yǎng)時間增加上皮細胞標(biāo)志物表達增加、間質(zhì)細胞標(biāo)記物表達下降，進一步闡明

6、了骨髓間充質(zhì)干細胞在共培養(yǎng)體系下隨時間進展不斷向子宮內(nèi)膜方向分化。第三部分，為研究B M S C s 向子宮內(nèi)膜腺上皮方向分化過程發(fā)生的一系列蛋白質(zhì)分子及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路變化，選取第七天共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化組與單獨培養(yǎng)組比值> 1 ．2 或< O ．8 3 3 的蛋白作為差異蛋白進行分析。差異蛋白的系統(tǒng)聚類分析從整體差異蛋白水平進一步闡明了共培養(yǎng)體系誘導(dǎo)后的分化；差異蛋白的分子功能、生物學(xué)過程、信號通路的分析顯示，能量代謝是重要基礎(chǔ)，