不同牙周狀態(tài)下牙齦組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平的差異性探究.pdf

1、大量研究表明細(xì)胞凋亡參與了牙周疾病的病理生理過程，而與細(xì)胞凋亡相關(guān)的通路主要分為線粒體途徑、死亡受體途徑、顆粒酶 B途徑以及近年來新發(fā)現(xiàn)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）途徑。ERS是組織及細(xì)胞在不利的生存環(huán)境下產(chǎn)生的一種應(yīng)激性反應(yīng)，其目的在于維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，主要途徑為保護(hù)性的非折疊蛋白反應(yīng)( unfolded protein response，UPR)。UPR可以通過蛋白質(zhì)生成減慢、折疊功能

2、加強、未折疊蛋白降解等途徑適應(yīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，對細(xì)胞起保護(hù)作用，但是當(dāng)刺激持續(xù)存在或強度過大，超過細(xì)胞自我調(diào)節(jié)能力時則會誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，細(xì)胞整體由促生存向促凋亡方向發(fā)生轉(zhuǎn)變。
　　牙齦作為唯一暴露于口腔及各類牙周疾病起始部位的牙周組織，探究牙齦組織從健康到慢性牙齦炎再到慢性牙周炎及侵襲性牙周炎的發(fā)展過程中其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平發(fā)生的改變具有重要的臨床意義。當(dāng)牙周疾病發(fā)生時，牙周致病菌的致病成分及其產(chǎn)生的毒素等可以使牙齦上皮的多種粘結(jié)蛋白如

3、上皮鈣黏素和封閉蛋白-1等的表達(dá)水平出現(xiàn)異常，上皮細(xì)胞間的相互連接受到破壞發(fā)生，牙齦結(jié)合上皮通透性顯著增加，導(dǎo)致菌斑微生物更易于穿過牙齦上皮的物理屏障，到達(dá)上皮深層組織，從而促進(jìn)牙周炎的發(fā)展；此外，牙齦上皮分泌的多種免疫因子如抗菌肽LL-37、人β防御素等在抵御菌斑微生物的入侵，預(yù)防牙周病的發(fā)展過程中均起到了重要作用。
　　目前已有文獻(xiàn)報道ERS參與了慢性牙周炎的發(fā)病過程，有研究報道指出在慢性牙周炎情況下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激上游標(biāo)志物GRP

4、78及下游凋亡相關(guān)因子C HOP升高，但是健康與慢性牙齦炎，侵襲性牙周炎情況下ERS水平的差異表達(dá)情況尚無相關(guān)報道。
　　目的：
　　初步探討健康、慢性牙齦炎、慢性牙周炎及侵襲性牙周炎牙齦組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平是否存在差異。
　　方法：
　　探究不同狀態(tài)下牙齦組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物 GRP78、PERK、ATF4、CHOP的表達(dá)變化：
　　臨床收集健康、慢性牙齦炎、慢性牙周炎及侵襲性牙周炎患者的牙齦，通過免疫

5、組化染色對牙齦組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物的表達(dá)水平進(jìn)行定性分析；實時定量PCR檢測牙齦組織中GRP78、PERK、ATF4、CHOP的mRN A表達(dá)量；蛋白質(zhì)印跡法檢測牙齦組織中GRP78、PERK、ATF4、CHOP的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組化結(jié)果顯示：
　　GRP78及 CHO P陽性表達(dá)細(xì)胞率均為侵襲性牙周炎組＞慢性牙周炎組＞慢性牙齦炎組＞牙周健康組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；PERK及 A

6、TF4牙齦組織中陽性細(xì)胞表達(dá)率的統(tǒng)計結(jié)果為慢性牙周炎＞慢性牙齦炎＞健康及侵襲性牙周炎組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），健康組及侵襲性牙周炎組中PERK及ATF4兩種因子表達(dá)量的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.Real-timePCR結(jié)果顯示：
　　GRP78、CHO P mRNA表達(dá)量呈現(xiàn)一致性，均表現(xiàn)為健康組＜慢性牙齦炎組＜慢性牙周炎組＜侵襲性牙周炎組，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。PERK m

7、RNA表達(dá)量為健康組與侵襲性牙周炎組間無顯著性差異（P＞0.05），慢性牙齦炎組及慢性牙周炎組表達(dá)均有升高，且慢性牙周炎組高于慢性牙齦炎組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。ATF-4mRNA的表達(dá)結(jié)果為健康組及侵襲性牙周炎組間表達(dá)量未見顯著性差異（P＞0.05）；慢性牙齦炎組與慢性牙周炎組高于健康及侵襲性牙周炎組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；但慢性牙齦炎組及慢性牙周炎組間表達(dá)未見顯著性差異（P＞0.05）。
　　3.蛋白

8、印跡法結(jié)果顯示：
　　GRP78、CHOP蛋白在健康組、慢性牙齦炎組、慢性牙周炎組及侵襲性牙周炎組的表達(dá)量為：健康組＜慢性牙齦炎組＜慢性牙周炎組＜侵襲性牙周炎組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；PERK、ATF-4蛋白的表達(dá)情況為：健康組與侵襲性牙周炎組＜慢性牙齦炎組＜慢性牙周炎組，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而健康組及侵襲性牙周炎兩組間PERK、ATF-4蛋白的表達(dá)量的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。