TSPO通過(guò)調(diào)控腎臟AT1R表達(dá)促進(jìn)孕期LPS暴露子代血壓升高的機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：
　　高血壓及其并發(fā)癥已經(jīng)成為危害我國(guó)人民健康的第一位危險(xiǎn)因素。高血壓是基因與環(huán)境相互作用的結(jié)果，環(huán)境因素不僅包括胎兒出生后的外部環(huán)境，也包括胚胎發(fā)育階段的宮內(nèi)環(huán)境。現(xiàn)代生物學(xué)提出了“成人慢性病的胚胎源性學(xué)說(shuō)”，即成人的諸多慢性疾病如高血壓、糖尿病等起源于胚胎發(fā)育時(shí)期的可塑性。大量報(bào)道顯示高血壓發(fā)病與胚胎發(fā)育階段不良因素刺激密切相關(guān)。許多孕婦在孕期均出現(xiàn)過(guò)不同程度的感染，而孕期感染往往與不良出生結(jié)局相關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，孕

2、期脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)暴露模擬孕期感染可導(dǎo)致子代血壓升高，提示孕期感染與子代血壓密切相關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)孕期LPS暴露的子代大鼠腎臟多巴胺D1受體(Dopamine D1receptor，D1R)功能受損，導(dǎo)致其介導(dǎo)的尿鈉排泄功能降低。D1R與血管緊張素Ⅱ1型受體(AngiotensinⅡtype1receptor，AT1R)之間存在相互作用，兩者功能平衡在尿鈉排泄與血壓調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要作用。在多種高血

3、壓大鼠模型中，腎臟D1R功能受損同時(shí)伴隨AT1R功能增強(qiáng)，導(dǎo)致水鈉潴留，但孕期LPS暴露對(duì)子代腎臟AT1R的表達(dá)及功能是否有影響，尚不清楚。
　　我們前期研究發(fā)現(xiàn)，孕期LPS暴露子代大鼠的腎臟氧化應(yīng)激水平增高，后者是AT1R表達(dá)和功能增強(qiáng)的重要原因。但是，孕期LPS暴露導(dǎo)致子代腎臟氧化應(yīng)激水平上升的原因尚不清楚。線粒體是氧化應(yīng)激的重要參與者，大量研究證明線粒體功能障礙導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species

4、，ROS)增加。孕期LPS暴露子代大鼠腎臟血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)水平增高，而AngⅡ誘導(dǎo)的高血壓大鼠模型的腎臟近曲小管轉(zhuǎn)位蛋白(Translocator protein，TSPO)表達(dá)明顯上調(diào)。TSPO是一種包含169個(gè)氨基酸（富含色氨酸）的線粒體外膜蛋白。在多種高血壓大鼠模型中，腎臟TSPO表達(dá)明顯上升，提示腎臟TSPO與血壓升高之間存在某種關(guān)聯(lián)。既往研究表明腎臟TSPO與腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-

5、angiotensin system，RAS)之間存在千絲萬(wàn)縷的關(guān)系，說(shuō)明腎臟TSPO可能通過(guò)RAS參與血壓調(diào)控。RAS是影響腎臟尿鈉重吸收作用的重要調(diào)節(jié)系統(tǒng)，其主要生理學(xué)功能是AngⅡ通過(guò)AT1R發(fā)揮水鈉潴留效應(yīng)。在原發(fā)性高血壓、糖尿病高血壓等動(dòng)物模型中，腎臟AT1R表達(dá)增加是尿鈉重吸收增多、血壓升高的重要因素。在孕期LPS暴露子代大鼠腎臟中，TSPO表達(dá)是否增加以及TSPO是否通過(guò)影響腎臟AT1R參與血壓調(diào)控尚不清楚。
　　基

6、于上述依據(jù)，我們提出假設(shè)：1.孕期LPS暴露造成子代大鼠腎臟AT1R表達(dá)及其介導(dǎo)的尿鈉重吸收增加，從而引起血壓升高;2.孕期LPS暴露導(dǎo)致子代大鼠腎臟TSPO表達(dá)上調(diào)，TSPO促進(jìn)腎臟AT1R表達(dá)。因此，本課題將研究孕期LPS暴露子代大鼠腎臟AT1R表達(dá)及其介導(dǎo)的尿鈉重吸收功能，以及腎臟TSPO對(duì)AT1R的調(diào)控作用。
　　研究方法：
　　1.觀察對(duì)照組和LPS組子代大鼠基礎(chǔ)狀態(tài)的血壓、尿量和尿鈉排泄是否具有差異;通過(guò)腎上腺動(dòng)

7、脈灌注AT1R阻滯劑坎地沙坦，觀察AT1R介導(dǎo)的尿鈉重吸收作用有無(wú)變化;免疫印跡(Western blot，WB)和定量聚合酶連鎖反應(yīng)(Quantificational real-time polymerase chain reaction，QT-PCR)檢測(cè)腎臟AT1R蛋白和信使核糖核酸(Messenger ribonucleic acid，mRNA)表達(dá)水平。
　　2.免疫組織化學(xué)和免疫熒光檢測(cè)SD大鼠(Sprague-Daw

8、ley rat，SD rat)TSPO的腎臟組織分布和亞細(xì)胞定位，Western blot和QT-PCR檢測(cè)對(duì)照組和LPS組子代大鼠腎臟TSPO蛋白和mRNA表達(dá)水平。
　　3.采用TSPO抑制劑R05-4864研究TSPO對(duì)血壓的影響，將子代大鼠分成4組：對(duì)照組子代，對(duì)照組子代+R05-4864，LPS組子代，LPS組子代+R05-4864;給予R05-4864作用后，監(jiān)測(cè)血壓、尿量和尿鈉排泄量是否改變;通過(guò)腎上腺動(dòng)脈灌注AT1

9、R抑制劑坎地沙坦，觀察腎臟AT1R介導(dǎo)的尿鈉重吸收功能有無(wú)差異;Western blot和QT-PCR檢測(cè)腎臟AT1R蛋白和mRNA表達(dá)。
　　研究結(jié)果：
　　1.較對(duì)照組子代大鼠，LPS組子代大鼠血壓上升、尿量和尿鈉排泄量減少;灌注AT1R抑制劑坎地沙坦后LPS組子代大鼠尿鈉排泄率增加，LPS組子代大鼠腎臟AT1R表達(dá)上調(diào);提示LPS組子代大鼠AT1R表達(dá)增加引起其介導(dǎo)的尿鈉重吸收增強(qiáng)是血壓升高的原因。
　　2.LP

10、S組子代大鼠腎臟皮質(zhì)TSPO mRNA和蛋白表達(dá)較對(duì)照組子代明顯增加。TSPO在腎臟近曲小管細(xì)胞定位于線粒體。
　　3.TSPO抑制劑R05-4864降低LPS組子代大鼠血壓、增加24h尿量和尿鈉排泄量;灌注AT1R抑制劑坎地沙坦發(fā)現(xiàn)，R05-4864通過(guò)腎臟AT1R促進(jìn)LPS組子代大鼠尿鈉排泄，免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明R05-4864抑制LPS組子代大鼠腎臟AT1R表達(dá)，提示TSPO促進(jìn)腎臟AT1R表達(dá)。
　　研究結(jié)論：