1、WAP抗菌肽的表達(dá)與功能研究2、家蠅proPO系統(tǒng)關(guān)鍵基因的鑒定與表達(dá)分析.pdf

1、無脊椎動(dòng)物沒有獲得性免疫，只有先天性免疫，而先天性免疫包括細(xì)胞免疫和體液免疫，抗菌肽和proPO激活系統(tǒng)則是體液免疫的兩種重要組成成分，在昆蟲的免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。本文主要研究了wap抗菌肽和proPO激活系統(tǒng)，對(duì)抗菌肽在真核生物體內(nèi)的功能以及體外表達(dá)進(jìn)行了研究，對(duì)proPO激活系統(tǒng)中的關(guān)鍵基因進(jìn)行了定位與分類，并對(duì)其表達(dá)模式進(jìn)行了初步的探索。
　　本文利用果蠅這一遺傳背景清晰的真核生物，將外源wap基因?qū)牍夡w內(nèi)，構(gòu)建了U

2、AS-wap轉(zhuǎn)基因果蠅品系。并利用遺傳變異法對(duì)wap在UAS-wap轉(zhuǎn)基因果蠅品系中的染色體位置進(jìn)行了基因定位，得到了wap分別插入在轉(zhuǎn)基因果蠅性染色體、第二染色體、第三染色體基因型的品系，將它們與actin-Gal4果蠅雜交，實(shí)現(xiàn)了wap基因在它們雜交后代果蠅中的過表達(dá)，通過QPCR檢測發(fā)現(xiàn)，wap基因在mRNA水平的表達(dá)量明顯高于對(duì)照，有的達(dá)100多倍。并對(duì)wap抗菌肽在轉(zhuǎn)基因果蠅體內(nèi)的抗菌功能進(jìn)行了探究與驗(yàn)證，并獲得了明確的抗菌效

3、果。該結(jié)果為新型抗菌藥物的研發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。
　　隨著大家對(duì)抗菌肽的重視程度越來越高，已經(jīng)有人用原核表達(dá)系統(tǒng)在體外成功的獲得了WAP重組蛋白，并且測得其有明顯的抗菌活性，但是WAP抗菌肽在真核表達(dá)系統(tǒng)的體外表達(dá)還未曾有人成功。本文對(duì)WAP抗菌肽在真核表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)做了研究，成功的構(gòu)建了wap/pPIC9K重組表達(dá)載體，獲得了含有wap/pPIC9K重組質(zhì)粒的真核表達(dá)菌株。另外針對(duì)目前原核表達(dá)獲得的WAP抗菌肽都是以包涵體形式存

4、在的、不利于WAP生物活性的發(fā)揮及利用這一技術(shù)難題，我們想要找到一種可以高產(chǎn)量的獲得可溶性WAP的方法，因此本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了WAP的原核表達(dá)。構(gòu)建wap/pET32a/Rosetta重組表達(dá)菌株，通過體外誘導(dǎo)表達(dá)，獲得了可溶性的 WAP抗菌肽重組蛋白。獲得可溶性的 WAP抗菌肽是一大技術(shù)上的突破，同時(shí)也為WAP抗菌肽早日實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。
　　同時(shí)體液免疫中的另一大免疫因子 proPO激活系統(tǒng)的研究也逐漸引起了科學(xué)界的重

5、視，目前國內(nèi)外對(duì)proPO激活系統(tǒng)的全部成分都還不清楚，本實(shí)驗(yàn)室著重研究了proPO激活系統(tǒng)中的幾個(gè)關(guān)鍵基因：酚氧化酶原(proPO)、激活酶(PAP)、抑制因子(Serpin)、受體因子(PGRP)。對(duì)這些關(guān)鍵基因進(jìn)行了鑒定與分類，并對(duì)其表達(dá)模式進(jìn)行了初步的分析。
　　本文通過轉(zhuǎn)錄組測序、序列分析與基因克隆技術(shù)，篩選出家蠅Serpins類、PAP類基因的Unigeen，并對(duì)其進(jìn)行序列拼接、驗(yàn)證、分析和結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測，初步將Ser