慢病毒載體介導(dǎo)COX-2基因沉默在有骨髓間充質(zhì)干細胞中的表達及對干細胞定向分化能力影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[背景]:目前，COX-2基因沉默在干細胞中的研究還處在初級階段。
　　[目的]:構(gòu)建攜帶COX-2基因沉默的慢病毒載體，觀察其在人骨髓間充質(zhì)干細胞中的表達，以及其定向分化潛能變化情況。
　　[方法]:應(yīng)用重組慢病毒技術(shù)構(gòu)建攜帶沉默COX-2基因和綠色熒光蛋白的慢病毒載體，并用其轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)第3代的人骨髓間充質(zhì)干細胞，以無目的基因的慢病毒轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細胞和未做處理的人骨髓間充質(zhì)干細胞分別作為陰性對照組和空白組進行對比。

2、轉(zhuǎn)染后7天分別提取各組細胞的總RNA和蛋白檢測COX-2表達量。對COX-2基因沉默的人骨髓間充質(zhì)干細胞和正常人骨髓間充質(zhì)干細胞定向誘導(dǎo)，觀察COX-2基因沉默對人骨髓間充質(zhì)干細胞成脂、成骨、成軟骨能力的影響。
　　[結(jié)果與結(jié)論]:慢病毒轉(zhuǎn)染3d后，熒光顯微鏡下可見人骨髓間充質(zhì)干細胞發(fā)出綠色熒光，陰性對照組轉(zhuǎn)染效率可達90％以上，實驗組轉(zhuǎn)染效率達85％以上。RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示，COX-2基因在人骨髓

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