外源性肝細胞生長因子激活心肌細胞缺氧后自噬抑制凋亡的研究.pdf

1、背景：
　　心血管疾病是非感染性疾病中威脅全球人類健康的最主要疾病之一。盡管心血管疾病的死亡人數(shù)在過去半個世紀已顯著下降，但據(jù)世界衛(wèi)生組織(WorldHealth Organization，WHO)統(tǒng)計顯示心血管疾病仍然是世界上致死率最高的疾病。其中急性心肌梗死為心血管疾病中急性期死亡率較高的致病因素。部分患者經(jīng)過急性期后，因心肌細胞損傷無法修復(fù)而影響心臟收縮功能，最終導(dǎo)致心力衰竭。由于心力衰竭的流行、發(fā)生率以及經(jīng)濟負擔逐年增長，

2、因此需要尋找有效的減少急性心肌梗死引起的心肌細胞損失的方法。
　　肝細胞生長因子(Hepatocyte growth factor，HGF)及其受體c-met對心肌缺血以及再灌注有保護作用，目前研究認為其心臟保護作用可通過成血管作用、抗纖維化作用、抗炎作用、心肌細胞保護作用和細胞再生作用等。而其對心肌細胞的保護作用主要通過降低細胞凋亡相關(guān)蛋白，減少細胞凋亡有關(guān)。然而其中抗凋亡的機制仍不明確，對此方面的研究較少。
　　自噬是高

3、度保守的細胞生理過程，基礎(chǔ)自噬在各個系統(tǒng)中對細胞穩(wěn)態(tài)、器官發(fā)育等有重要作用。在有害的外界環(huán)境下基礎(chǔ)自噬被激活，激活后的自噬水平對細胞代謝和內(nèi)穩(wěn)定起支持作用，例如營養(yǎng)剝奪時，自噬通過對自身細胞器和長壽蛋白的吞噬降解來提供細胞生存的原料。在心臟中自噬活動一般由心肌缺血誘導(dǎo)增加。在缺血早期，適應(yīng)性自噬活動可以減少細胞凋亡，若抑制此期自噬則導(dǎo)致離體心肌細胞死亡，在體心臟功能受損。
　　因此，本項研究假設(shè)適度的自噬活動在心肌缺血時對心肌細胞

4、有保護作用，而HGF則通過對細胞自噬的調(diào)控保護心肌細胞，減少細胞凋亡。
　　材料和方法：
　　為了驗證上述假設(shè)，本項研究選用乳大鼠原代心肌細胞作為研究對象設(shè)計實驗，使用HGF作為心肌保護因子、HGF中和抗體以中和細胞培養(yǎng)基中的HGF、3-MA作為細胞自噬抑制劑;利用蛋白免疫印跡法、酶聯(lián)免疫吸附試驗、透射電子顯微鏡、自噬雙標腺病毒（mRFP-GFP-LC3）、線粒體膜電位檢測等多種分子生物學手段，在離體培養(yǎng)細胞水平研究缺氧對心

5、肌細胞自噬水平改變、心臟保護因子HGF對心肌細胞的作用。
　　結(jié)果：
　　1、心肌細胞缺氧后細胞自噬水平增加，缺氧2小時早期自噬水平最高。凋亡水平隨缺氧不斷增加。
　　2、外源性HGF可以降低細胞凋亡，誘導(dǎo)細胞缺氧早期的自噬增高。HGF中和抗體可降低細胞自噬，增加細胞凋亡。
　　3、自噬抑制劑可以抑制HGF誘導(dǎo)的細胞自噬，降低HGF對細胞的保護作用。
　　4、HGF主要通過增加受損線粒體的有效標記，并進行自