GILZ基因沉默增強膿毒癥血清誘導成肌細胞合成代謝的實驗研究.pdf

1、目的:構建靶向大鼠GILZ的siRNA腺病毒載體，研究GILZ基因沉默對膿毒癥血清誘導成肌細胞代謝的影響。
　　方法:
　　(1)應用盲腸結扎穿孔法建立大鼠膿毒癥模型，留取膿毒癥血清。
　　(2)設計靶向大鼠GILZ mRNA的特異性siRNA，退火形成雙鏈DNA Oligo，插入AgeⅠ和EcoRⅠ雙酶切的GV119載體，構建穿梭質(zhì)粒，測序驗證后與骨架質(zhì)粒pBHG loxΔE1,3 Cre共轉(zhuǎn)染HEK293細胞，收集

2、重組腺病毒，擴增純化后測定病毒滴度。
　　(3)重組腺病毒感染體外培養(yǎng)的L6細胞，觀察綠色熒光蛋白表達情況及形態(tài)學改變，測定重組腺病毒的感染效率，實時熒光定量聚合酶鏈式反應檢測GILZ的表達量。
　　(4)膿毒癥血清誘導72h后，實時熒光定量聚合酶鏈式反應檢測GILZ、MyHC、MyoD、myogenin的表達量。
　　結果:
　　(1)應用盲腸結扎穿孔法可成功建立膿毒癥大鼠模型，大鼠的一般情況、體重、肛溫、炎癥

3、指標、細菌培養(yǎng)及開腹探查結果符合膿毒癥診斷標準。
　　(2)成功構建重組腺病毒，測序結果顯示siRNA正確插入GV119，實時熒光定量聚合酶鏈式反應結果顯示Ad-siRNA-1-GILZ組的GILZ表達量最低，與空白對照組和陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義，其沉默效率為59.8％，重組腺病毒滴度為2.0×1010PFU/mL。
　　(3)Ad-siRNA-1-GILZ在Enhanced Infection Solution的