尖吻蝮蛇中一種新的絲氨酸蛋白酶的純化、性能及ACFⅡ降血壓機(jī)理的研究.pdf

1、全文由兩個(gè)部分組成。第一部分的研究?jī)?nèi)容:從尖吻蝮蛇粗毒中提取出一種新的纖維蛋白原溶解酶，并將其命名為DAnase，研究了DAnase提純方法并對(duì)其相關(guān)理化性質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)。第二部分的研究?jī)?nèi)容:研究了尖吻蝮蛇蛇毒中抗凝血因子Ⅱ(ACFⅡ)的降血壓作用。文獻(xiàn)報(bào)道靜脈注射一定劑量的ACFⅡ能夠引起大鼠血壓降低，說(shuō)明其具有降血壓作用，但是ACFⅡ的降血壓作用機(jī)理目前尚不清楚。在這部分中對(duì)ACFⅡ的降血壓機(jī)理進(jìn)行了研究。全文分為如下三章。
　

2、　第一章:我們分別介紹了纖維蛋白（原）溶解酶、蛇毒金屬蛋白酶、蛇毒絲氨酸蛋白酶、血液凝固過(guò)程、高血壓、一氧化氮(NO)和一氧化氮合成酶(NOS)和ACFⅡ的相關(guān)知識(shí)。
　　第二章:通過(guò)陰陽(yáng)離子交換層析的方法從尖吻蝮蛇蛇毒中提取出一種新的纖維蛋白原酶，并將其命名為DAnase。纖維蛋白原酶通常只有一條鏈，與其它纖溶酶不同，DAnase是一個(gè)由二硫鍵連接兩條鏈的二聚體。在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)上DAnase的表

3、觀分子量為25 kDa，通過(guò)毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦的方法檢測(cè)出其等電點(diǎn)為6.03。DAnase具有纖維蛋白原酶活性，但不具有水解纖維蛋白的活性。它優(yōu)先水解纖維蛋白原的Aα鏈，接著水解Bβ鏈，但對(duì)γ鏈沒(méi)什么影響。DAnase也展示出了精氨酸酯酶活性，并且其水解纖維蛋白原能力和精氨酸酯酶活性都會(huì)被苯甲基磺酰氟(PMSF)和三-（2-甲酰乙基）膦鹽酸鹽(TCEP)抑制，但EDTA對(duì)其活性卻沒(méi)有任何影響，說(shuō)明DAnase是一種絲氨酸蛋白酶，且其活性依賴

4、于二硫鍵。DAnase強(qiáng)烈抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集，但不具有水解ADP能力，說(shuō)明DAnase對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用與其纖維蛋白原酶水解活性有關(guān)。DAnase不具有出血活性，也不具有活化凝血因子(ⅩⅢ)(F(ⅩⅢ))的能力。
　　第三章:通過(guò)陰陽(yáng)離子交換層析的方法從尖吻蝮蛇蛇毒中純化出ACFⅡ，ACFⅡ是一種凝血因子Ⅸ/Ⅹ結(jié)合蛋白，同時(shí)具有抗凝血作用和降血壓作用。在本章中，我們研究了ACFⅡ?qū)π∈笱逯幸谎趸康挠?/p>

5、響。結(jié)果表明，ACFⅡ會(huì)引起血清中NO含量增加，并且存在劑量依賴性。但是NO濃度會(huì)隨著時(shí)間增加而逐漸減少，并最終穩(wěn)定下來(lái)。ACFⅡ?qū)ρ逯蠳O含量的影響作用會(huì)被一氧化氮合成酶抑制劑N-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）、鈣調(diào)蛋白抑制劑N-6（氨基己烷基）-5-氯-1-萘-磺胺(W-7)抑制，而心鈉素抑制劑靛紅(Isatin)對(duì)其沒(méi)什么影響，表明ACFⅡ的降血壓作用可能與一氧化氮合成酶或是鈣調(diào)蛋白有關(guān)。為了進(jìn)一步探索，我們從鼠腦中提取出鈣調(diào)蛋