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1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文人肺癌細(xì)胞懸浮積聚體和失巢凋亡抗性的信號傳導(dǎo)姓名:張星申請學(xué)位級別:博士專業(yè):腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師:管忠震20040425博十學(xué)位論文中文摘要是對照細(xì)胞聚集體體積的2倍大??;轉(zhuǎn)化的噬齒類成纖維細(xì)胞形成的聚集體體積比正常對照的體積大而且數(shù)量多,可能這種細(xì)胞聚集作用的不同是與細(xì)胞的存活有關(guān)。并且研究發(fā)現(xiàn)懸浮狀態(tài)細(xì)胞存活能力和聚集體的形式與軟瓊脂集落形成和裸鼠的致瘤性有關(guān)。因此,懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞聚集可望成為新的致瘤性指示劑。目前對
2、失巢凋亡的機制未研究清楚而且腫瘤細(xì)胞積聚體的分子機制也未有報道。對化療藥物內(nèi)源性和獲得性的耐藥是化療最重要的困難,有報道表明腫瘤細(xì)胞的聚集體是化療耐藥的機制之一,當(dāng)腫瘤細(xì)胞聚集體去聚集化或單層培養(yǎng),耐藥就會消失,重新三維聚集化培養(yǎng)耐藥又會獲得。所以,研究腫瘤細(xì)胞懸浮培養(yǎng)聚集體的形態(tài)學(xué)和機理對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和治療有著重要的意義。2研究方法和結(jié)果:21懸浮狀態(tài)細(xì)胞積聚體是肺癌失巢凋亡抗性機制之一211懸浮培養(yǎng)正常上皮細(xì)胞出現(xiàn)凋亡正常
3、MDCK和HBE細(xì)胞在polyHEMA培養(yǎng)下,阻斷了細(xì)胞和ECM的粘附,會發(fā)生凋亡。DNA電泳出現(xiàn)梯狀條帶,凋亡的典型特征。流式細(xì)胞儀分析顯示G1峰前出現(xiàn)亞G1峰,即凋亡峰。但是,腫瘤細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)狀態(tài)下,不會發(fā)生凋亡。這些結(jié)果表明懸浮培養(yǎng)阻斷了細(xì)胞和ECM的粘附,會誘導(dǎo)正常上皮凋亡,但不會誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。212懸浮培養(yǎng)肺癌細(xì)胞不會發(fā)生凋亡,它們產(chǎn)生細(xì)胞積聚現(xiàn)象培養(yǎng)細(xì)胞積聚體和軟瓊脂糖培養(yǎng)集落與致瘤性是相關(guān)的。已有研究報道不同的方法(
4、自發(fā)、化學(xué)和病毒)轉(zhuǎn)化的大鼠、小鼠、田鼠、人、狗、貓和羊的細(xì)胞株懸浮狀態(tài)積聚體與腫瘤潛在的致瘤性相關(guān)。在軟瓊脂糖集落形成實驗,正常細(xì)胞MDCK不形成克隆SKLU1和A549生長并形成小的集落,H1792和H1792生長并形成大的集落,這與它們的腫瘤原性相關(guān)。我們的實驗發(fā)現(xiàn)polyHEMA懸浮培養(yǎng)狀態(tài)下,不同的細(xì)胞形成大小不同的積聚體。H1792和H460形成的聚集體體積大而且緊密;A549和SK—Lu一1形成的聚集體小而松散;MDCK是
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