不同濃度的SDF1,bFGF,IL-8對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的趨化,增殖及分化的影響.pdf

1、目的：分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrowmesenchymal stem cells，BMSCs），研究比較趨化因子基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal cell–derived factor-1，SDF-1）、堿性成纖維生長因子（Basic fibroblast growth factor，bFGF)和白介素-8（interleukin-8，IL-8）在多個濃度下對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的趨化作用；通過 MTT法檢測不同濃

2、度的SDF1，bFGF,IL-8對BMSCs增殖活性的影響；實時熒光定量 PCR檢測不同濃度的三種因子對BMSCs向牙周組織方向分化的影響。最終選擇最佳因子及濃度分別用于促進BMSCs的內(nèi)源性歸巢，增殖及分化，應(yīng)用于牙周組織的再生與修復(fù)。
　　方法：抽取SD大鼠骨髓，分離培養(yǎng)BMSCs。1.實驗共分為3組：SDF1組，bFGF組，IL-8組，每組因子濃度為0（對照濃度）、10、50、100、200、400 ng/mL（實驗濃度），

3、利用transwell小室研究不同濃度的SDF1，bFGF，IL-8對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的趨化作用，獲得3種因子趨化 BMS Cs的最佳濃度。2.實驗共分為3組：S DF1組，bF GF組，IL-8組，每組因子濃度為0（對照濃度）、10、20、50、100、200、400 ng/mL（實驗濃度），通過MTT法檢測不同濃度的三種因子對BMSCs增殖活性的影響；3.相同濃度下的各因子作用于BMS C后，實時熒光定量PCR（Real-time）

4、檢測collagen type I（colⅠ），Runt-related transcription factor2(Runx-2)，osteocalcin(OCN)，alkaline phos-phatase(ALP)的基因表達(dá)。各因子的濃度設(shè)定為20、50、100 ng/mL。
　　結(jié)果：1.與0 ng/mL（對照濃度）組相比，3種因子均可趨化BMSCs（P＜0.05）；50、100、400 ng/mL濃度下，SDF1對BMS

5、Cs的趨化作用顯著高于bFGF(P＜0.05);200 ng/mL濃度下，SDF1對BMSCs的趨化作用強于IL-8；SDF1及IL-8對BMSc趨化作用的最佳濃度均為100 ng/mL，bFGF的最佳濃度為200 ng/mL。2.第1天，第4天，10,20,50 ng/m l的S DF1對細(xì)胞無顯著性影響(P＞0.05），100,200,400 ng/m lS DF1反而抑制細(xì)胞的增殖；第7天200,400ng/m L的SDF1抑制細(xì)

6、胞的增殖，其它濃度無顯著影響。第1天，第4天時，50ng/ml的bFGF可顯著促進BMSCs增殖（P＜0.05）,其它濃度無顯著影響（P＞0.05）；第7天，各濃度的bF GF對BMS Cs的增殖均無顯著影響。各濃度的IL-8對BMSCs的增殖有顯著性抑制(P＜0.05)。3.20ng/mL濃度下，SDF1可顯著促進col1，Runx2，ALP的表達(dá)；bFGF僅可促進 OCN的表達(dá)；IL-8可顯著促進 Runx2,OCN，ALP的表達(dá)。

7、50ng/mL濃度下，SDF1可促進 col1，Runx2的表達(dá)； bFGF均可顯著促進四種基因的表達(dá)，包括col1，Runx2，OCN,ALP；IL-8可顯著促進Runx2，OCN的表達(dá)。100ng/mL濃度時，只有bFGF僅可促進 col1的表達(dá)。
　　結(jié)論：1. SDF-1、bFGF、IL-8均可趨化BMSCs，SDF-1與IL-8的趨化效果更佳。2.SDF1在低濃度時（10,20,50ng/mL）對BNSCs增殖活性無顯著