DKK1重組蛋白干預(yù)染氟軟骨細(xì)胞增殖及X型膠原表達(dá)的研究.pdf

1、目的：利用DKK1重組蛋白干預(yù)染氟軟骨細(xì)胞,觀察干預(yù)前后染氟軟骨細(xì)胞增殖及X型膠原的表達(dá)變化,探討DKK1在氟性骨損傷骨周化骨病變中的作用及機(jī)制。
　　方法：機(jī)械—酶消化法提取4周齡SPF級(jí)SD大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,分對(duì)照組和4個(gè)染氟組(5、10、20、40mg/LNaF溶液),MTT法測(cè)不同時(shí)段(24、48、72、96h)細(xì)胞增殖活性,ELISA測(cè)定細(xì)胞上清中COL-10及DKK1含量;取10mg/LNaF溶液劑量染氟72h的軟骨

2、細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),分非干預(yù)組和3個(gè)干預(yù)組(1、2、4μg/LDKK1重組蛋白PBS緩沖液),MTT法測(cè)各干預(yù)時(shí)段(0、12、24、36h)細(xì)胞增殖活性,ELISA測(cè)細(xì)胞上清中COL-10含量。
　　結(jié)果：染氟軟骨細(xì)胞MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,在24h的5、10、20mg/L劑量組;48h時(shí)的5、10、20mg/L劑量組;72h時(shí)的5、10、20mg/L劑量組;96h時(shí)的10mg/L劑量組中細(xì)胞增殖活性明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

3、義(P<0.05)。在72h及96h時(shí)的40mg/L劑量組細(xì)胞增殖活性則顯著降低(P<0.05)。COL-10含量在不同時(shí)段各染氟劑量組與對(duì)照組相比,均顯著升高(P<0.01);不同時(shí)段各染氟劑量組與5mg/L劑量組相比,在染氟24h時(shí),差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),48h時(shí),僅10mg/L劑量組COL-10含量(254.10±23.01)ng/L顯著高于5mg/L劑量組(230.36±12.50)ng/L(P<0.01);72h

4、及96h時(shí),10、20、40mg/L劑量組COL-10含量顯著升高(P<0.01)。染氟軟骨細(xì)胞DKK1含量顯示,與對(duì)照組相比,24h時(shí),各染氟劑量組DKK1含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);48h時(shí),20mg/L劑量組DKK1含量(24.74±0.95)μg/L顯著高于對(duì)照組(20.87±2.46)μg/L(P<0.01);72h及96h時(shí),10、20、40mg/L劑量組DKK1含量均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

5、
　　DKK1蛋白干預(yù)后,不同時(shí)段各干預(yù)組同非干預(yù)組相比,12h時(shí),干預(yù)C組細(xì)胞增殖活性顯著降低(P<0.05);24h時(shí),干預(yù)B組細(xì)胞增殖活性顯著降低(P<0.05);36h時(shí),干預(yù)A組細(xì)胞增殖活性顯著升高,C組則顯著降低(P<0.05)。各干預(yù)組COL-10含量同非干預(yù)組相比,干預(yù)12h后,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);干預(yù)24h后,干預(yù)B、C兩組COL-10含量(209.79±14.42)ng/L、(216.68±16.

6、66)ng/L顯著低于非干預(yù)組(246.26±12.41)ng/L(P<0.01);干預(yù)36h后,干預(yù)B、C兩組COL-10含量(214.85±17.11)ng/L、(210.96±15.38)ng/L顯著低于非干預(yù)組(248.43±12.72)ng/L(P<0.01)。
　　結(jié)論：低劑量染氟促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖,高劑量則表現(xiàn)為抑制作用;染氟軟骨細(xì)胞X型膠原表達(dá)升高,DKK1重組蛋白干預(yù)顯著抑制了染氟軟骨細(xì)胞增殖活性及X型膠原表達(dá)的升