丹七方抗大鼠血小板聚集的蛋白質(zhì)組學(xué)及藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、(1)丹參、三七為治療心血管疾病的傳統(tǒng)中藥,二者常配伍應(yīng)用。為研究其主要活性組分丹參總酚酸和三七總皂苷抑制血小板聚集的活性,分別比較了兩類物質(zhì)單用與合用對(duì)SD大鼠離體和在體血小板聚集率的影響。體外實(shí)驗(yàn)表明,丹參總酚酸、三七總皂苷均能抑制ADP誘導(dǎo)的大鼠洗滌血小板和富血小板血漿中血小板(PRP)聚集,但無(wú)協(xié)同效應(yīng)。以550mg·kg-1連續(xù)灌胃給藥5d后,丹參總酚酸與三七總皂苷均能顯著抑制ADP誘導(dǎo)的大鼠體內(nèi)富血小板血漿中血小板(PRP)

2、的聚集性,當(dāng)?shù)⒖偡铀崤c三七總皂苷的比例為5:1時(shí),協(xié)同抗ADP誘導(dǎo)的大鼠體內(nèi)PRP聚集作用最佳。同時(shí)還研究了丹參中作用最強(qiáng)的單體成分丹酚酸B,發(fā)現(xiàn)它能顯著抑制ADP誘導(dǎo)的大鼠體外洗滌血小板聚集,IC50為67.33±1.22μg·mL-1。
　　 (2)為進(jìn)一步闡明丹參總酚酸、三七總皂苷、丹酚酸B抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的作用機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)建立了丹參總酚酸、三七總皂苷、丹酚酸B處理前后血小板總蛋白質(zhì)的雙向電泳圖譜,利用MALD

3、I-TOF-MS技術(shù)識(shí)別并鑒定了兩不同組別血小板蛋白質(zhì)問(wèn)差異表達(dá)蛋白質(zhì)。這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)與鈣平衡、血小板激活、細(xì)胞跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)能量代謝、抗氧化系統(tǒng)及細(xì)胞骨架密切相關(guān),并應(yīng)用免疫印跡法驗(yàn)證了部分差異蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。
　　 (3)采用HPLC-UV,建立了丹參總酚酸與三七總皂苷合用(5:1)灌胃給藥后大鼠血漿中原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B含量同時(shí)測(cè)定方法,并對(duì)其進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究。色譜柱:Zorbax SB-C18 c

4、olumn(250 mm×4.6 mm,5μm)、；流速:1 mL·min-1；柱溫:30℃；檢測(cè)波長(zhǎng):280nm,以乙腈和0.026％磷酸水溶液梯度洗脫,血漿樣品以體積分?jǐn)?shù)為10％的鹽酸酸化,而后用乙酸乙酯萃取兩次,并根據(jù)測(cè)定結(jié)果求算主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果,四種成分的日內(nèi)與日間RSD％均小于15％,提取回收率均大于70％,線性關(guān)系良好(r>0.99)。原兒茶醛在10.0min達(dá)峰,Cmax為6.466μg·mL-1,AUC0-240值為

5、82.0μg·min·mL-1,迷迭香酸在11.7min達(dá)峰,Cmax為10.50μg·mL-1,AUC0-240值為446.6μg·min·mL-1,紫草酸在20.8min達(dá)峰,Cmx為5.950μg·mL-1,AUC0-240值為486.7μg·min·mL-1,丹酚酸B在8.33min達(dá)峰,Cmax為48.12μg·mL-1,AUC0-240值為1766μg·min·mL-1。
　　 (4)運(yùn)用HPLC-UV法檢測(cè)大鼠灌胃