MiR-22作為自噬和凋亡的天關增強5-FU的藥物敏感性.pdf

1、在消化道惡性腫瘤中，結直腸癌是高發(fā)的惡性腫瘤。近年來隨著中國城市化進程加快和居民生活方式日趨西方化，結直腸癌不僅在消化道腫瘤中發(fā)病率越來越高，在惡性腫瘤中發(fā)病率也高居前位;全球對結直腸癌的研究投入了大量的資金，截止2012年10月，也取得了大量的研究成果，國際上有關結直腸癌的文獻將近15000篇，明確了結直腸癌是個多基因、多步驟演進的復雜過程，但結直腸癌的早期診斷水平低下，其發(fā)病機制仍未明確，總體死亡率仍然高居不下。另外，結直腸癌化療耐

2、藥仍是其治療的一個難題。因此，明確結直腸癌發(fā)病機制以及尋找更為有效的治療手段提高治愈率乃至根治結直腸癌具有十分重大的臨床意義和社會經濟效益。
　　 自噬是由自噬基因調控的真核細胞降解細胞內細胞器和蛋白質的多步驟多程序高度進化保守的過程。其特征是形成自噬體，自噬體與溶酶體融合后被消化，并為細胞提供再循環(huán)的物質和能源。自噬涉及感染、免疫、衰老、腫瘤、神經退化性疾病、心臟病等疾病。自噬具有雙向作用，它既對生命體起到保護作用，也促進疾病

3、的發(fā)生發(fā)展。自噬在腫瘤形成發(fā)展和治療預后過程中，起到了十分重要的作用。非編碼RNA是不編碼蛋白質的RNA，通過基因轉錄后調控、剪切和修飾在很多生命活動中均起著舉足輕重的作用。非編碼的RNA中的MicroRNA是一類21～23 nt的小RNA，通過靶向mRNA的3端非編碼區(qū)域，阻遏其翻譯。MicroRNA廣泛參與了許多生物學行為包括自噬凋亡和許多疾病如腫瘤。
　　 我們用饑餓誘導自噬，并用免疫印跡、間接免疫熒光、EGFP-LC3-

4、Ⅱ和電鏡等方法證實了自噬被誘導;研究發(fā)現(xiàn)，miR-22與自噬發(fā)生水平呈負相關，當miR-22過表達載體轉染結直腸癌細胞SW620，細胞自噬水平下降，而miR-22抑制體轉染結直腸癌細胞RKO后，自噬水平上升，上述實驗結果從正反兩面驗證了miR-22抑制結直腸癌細胞自噬。為了研究miR-22的臨床治療意義，免疫印跡、臺盼蘭染色結果顯示，過表達miR-22增強了5-FU對結直腸癌細胞SW620的凋亡水平，相反在下調miR-22后的RKO細胞

5、中凋亡水平下降。我們在穩(wěn)定表達miR-22抑制體的RKO細胞中干擾ATG5抑制自噬后，免疫印跡、臺盼蘭染色發(fā)現(xiàn)miR-22可通過抑制自噬同時增加凋亡來增強結直腸癌細胞對5-FU的藥物敏感性。實驗結果也表明miR-22能增加對5-FU耐藥的結直腸癌細胞系HCT-8/5FU的凋亡水平和死亡率。通過在線軟件預測到BTG1的3'-UTR是miR-22的直接靶標，熒光素酶活性和免疫印跡證實了miR-22靶標BTG1抑制自噬。最后體內實驗也表明，m

6、iR-22通過抑制自噬上調凋亡進而增強了結直腸癌細胞對5-FU的藥物敏感性。
　　 通過體內外實驗，我們得出以下結論:
　　 1)miR-22通過靶向抑制其靶基因BTG1而抑制結直腸癌細胞自噬。
　　 2) miR-22通過抑制自噬同時上調凋亡而增強5-FU的藥物敏感性。
　　 我們首次在結直腸癌細胞中發(fā)現(xiàn)了miR-22一個新的功能，miR-22作為自噬與凋亡的開關，通過靶標BTG1的3'-UTR區(qū)轉錄后