siRNA抑制Hp vacA和cagA基因表達(dá)體外實驗研究.pdf

1、研究背景：幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，Hp)的發(fā)現(xiàn)已徹底地顛覆了人類關(guān)于許多種胃腸道疾病的基本理論，使某些胃腸道疾病如慢性、活動性胃炎和消化性潰瘍的病因?qū)W和治療學(xué)上出現(xiàn)了一場革命，Hp且與胃腺癌和胃粘膜相關(guān)性淋巴樣組織淋巴瘤(MALT)密切相關(guān)，1994年世界衛(wèi)生組織(WHO)/國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)已將Hp列為Ⅰ類致癌因子。目前，已發(fā)現(xiàn)Hp的毒力因子有多種，其中細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白(cytotoxinassoc

2、iatedantigen，CagA)、細(xì)胞空泡毒素(vacuolatingcytotoxin，VacA)與Hp致病性有關(guān)，也是目前Hp的研究熱點。 根除Hp在上述消化道疾病中具有十分重要的意義，但目前根除Hp的治療方案服藥次數(shù)多、劑量大，單劑藥物根除率低，而使用多聯(lián)藥物費用昂貴、治愈率不高且不能有效阻止Hp的再感染和復(fù)發(fā)，且耐藥菌株的增加也使抗Hp治療面臨越來越復(fù)雜的難題。 雖然Hp全菌疫苗有效，特別是在治療方面具有優(yōu)勢

3、，但有潛在的安全性問題；亞單位疫苗成分明確，具有較好的安全性，但需要安全而強效的粘膜佐劑，要給予足夠高的劑量發(fā)揮佐劑效力，且不能完全避免腹瀉等副作用。雖然有關(guān)構(gòu)建重組疫苗已經(jīng)做了許多工作，但重組疫苗難以在同一宿主中表達(dá)多個抗原，而且很難保證在定居后能穩(wěn)定表達(dá)所有抗原。還有一個危險是機體可能產(chǎn)生針對載體的免疫應(yīng)答，而預(yù)先存在的免疫可以阻止疫苗株的定居。雖然對Hp免疫預(yù)防已進(jìn)行了大量研究并取得了令人矚目的成果，但仍有大量問需急待解決。

4、 本研究依據(jù)RNAi技術(shù)原理，國際標(biāo)準(zhǔn)HpNCTC11637菌株和HpNCTC11639菌株為研究對象，設(shè)計針對vacA和cagA基因的siRNA片段，觀察靶向siRNA能否抑制HpvacA和cagA基因表達(dá)并觀察Hp培養(yǎng)超濾液對人胃黏膜上皮細(xì)胞株(GES-1)的影響。 第一部分：siRNA抑制HpvacA和cagA基因表達(dá)體外實驗 目的：優(yōu)化Hp的電轉(zhuǎn)化條件，觀察siRNA能否抑制HpvacA和cagA基因表達(dá)。

5、 結(jié)論：體外實驗中，Hp電轉(zhuǎn)化效率與電場強度和脈沖持續(xù)時間關(guān)系密切；siRNA特異抑制HpvacA和cagA基因表達(dá)，且與濃度和時間有關(guān)。 第二部分：Hp培養(yǎng)超濾液對GES-1的影響 目的：觀察Hp超濾液對GES-1細(xì)胞的空泡毒作用和對其增殖、調(diào)亡的影響。 結(jié)論：體外實驗中，Hp超濾液對GES-1細(xì)胞有空泡毒作用，且與Hp超濾液濃度有關(guān)；siRNA抑制vacA和cagA表達(dá)使Hp超濾液對GES-1細(xì)胞空泡毒作