葡萄球菌腸毒素B(SEB)中和抗體的協(xié)同作用及其分子機(jī)制.pdf

1、研究背景：葡萄球菌腸毒素B（SEB）是一種超抗原，通過結(jié)合T細(xì)胞上特定的TCRVβ區(qū)和MHC-Ⅱ類分子，活化T細(xì)胞使其釋放一系列的細(xì)胞因子，主要包括IFN-γ和TNF-α等，引起機(jī)體發(fā)生毒性休克綜合征（TSS）甚至死亡。SEB是一種潛在的生物武器，致死劑量在ng/kg體重左右。目前對(duì)毒素類物質(zhì)中毒的治療主要用中和抗體，如肉毒毒素抗血清在臨床上用來(lái)治療肉毒毒素中毒，靜脈注射人丙種球蛋白（IVIG）用來(lái)治療SEB中毒。在針對(duì)肉毒毒素和破傷風(fēng)

2、毒素的導(dǎo)克隆抗體（mAb）中和作用的研究中，均提示識(shí)級(jí)不同表位的mAbs組合有很強(qiáng)的協(xié)同作用。所以混合導(dǎo)克隆抗體可能是替代抗血清、提高療效并實(shí)現(xiàn)人源化的一種新途徑。組合抗體發(fā)揮協(xié)同作用的機(jī)制與其組合后親和力的提高和抗體對(duì)毒素覆蓋面積的增大有關(guān)，但確切的機(jī)制目前還不完全清楚。
　　目的：制備針對(duì)SEB的mAbs并篩選具有協(xié)同作用的組合抗體，通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)其中和作用，精確鑒定mAbs識(shí)級(jí)的表位和測(cè)定mAbs的親和力，研究不同表位在

3、毒素分子表面的分布規(guī)律以及對(duì)毒素構(gòu)象和功能產(chǎn)生的影響。
　　方法和結(jié)果：用常規(guī)方法制備了22株特異性強(qiáng)、效價(jià)高的抗SEBmAbs，以任意3株mAbs為一組等量混合，觀察其對(duì)SEB刺激T細(xì)胞產(chǎn)生的增殖效應(yīng)的抑制作用，篩選出中和活性最強(qiáng)的一組mAbs，由mAbsFMU-SEB-1，2和10組成，并通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)其中和作用進(jìn)行了證實(shí)。通過對(duì)SEB分子上參與TCR和MHC-Ⅱ類分子結(jié)合的氨基酸進(jìn)行定點(diǎn)突變，并且表達(dá)由SEB/SEC1構(gòu)成的

4、一系列雜合分子，鑒定3株抗體識(shí)級(jí)的表位：FMU-SEB-1識(shí)級(jí)的表位由138和143位的氨基酸組成，該區(qū)域與SEB-TCR、SEB-MHC-Ⅱ類分子相互作用的部位距離較遠(yuǎn)，提示可能與改變SEB的構(gòu)象有關(guān)系；FMU-SEB-2識(shí)級(jí)的表位由55、56、61、81和88位氨基酸組成，覆蓋SEB-TCR相互結(jié)合的區(qū)域；FMU-SEB-10識(shí)級(jí)的表位由91和177位氨基酸組成，這2個(gè)aa位于SEB-TCR結(jié)合位點(diǎn)的邊緣，其中91位aa靠近SEB-