紅細(xì)胞羰基應(yīng)激及谷胱甘肽的拮抗作用.pdf

1、自由基氧化和非酶糖基化是體內(nèi)兩大類物質(zhì)能量代謝過程中必然發(fā)生的生化副反應(yīng)。它們均會(huì)產(chǎn)生一系列的毒性羰基類物質(zhì)，其中丙二醛(MDA)是最主要的一種。該物質(zhì)在體內(nèi)易與含氨基的生物大分子發(fā)生交聯(lián)，形成不可逆的老年色素類物質(zhì)。在血液中，它們易與紅細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，引起一系列生理生化變化。本研究以羰基毒化衰老學(xué)說為理論基礎(chǔ)，將MDA和谷胱甘肽(GSH)引入到研究體系中，建立了探測(cè)中醫(yī)血瘀證及活血化瘀的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。從紅細(xì)胞的表觀粘度、形

2、態(tài)學(xué)、羰基蛋白含量及膜脂流動(dòng)性等方面對(duì)羰基的毒化作用及谷胱甘肽的去羰基毒化作用進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。 本學(xué)位論文研究工作主要分為四大部分： 一、紅細(xì)胞懸浮液表觀粘度通過紅細(xì)胞表觀粘度的測(cè)定，探索了MDA對(duì)血液羰基毒化的作用及GSH的拮抗作用。結(jié)果表明：MDA可提高紅細(xì)胞表觀粘度；GSH則能夠使之顯著下降，且具有濃度效應(yīng)，并與反應(yīng)的先后次序無關(guān)。這說明在正常的血液中普遍存在著羰．氨反應(yīng)，GSH可阻止或還原這一反應(yīng)。

3、 二、紅細(xì)胞形態(tài)的變化掃描電鏡結(jié)果顯示：MDA的羰基毒化作用能夠引起紅細(xì)胞發(fā)生交聯(lián)、聚集，導(dǎo)致其形態(tài)發(fā)生改變；而GSH的拮抗作用則可使紅細(xì)胞分散、修復(fù)。這從形態(tài)學(xué)上反映了MDA與紅細(xì)胞膜上蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的過程。而GSH的巰基能替代紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)上的氨基發(fā)生反應(yīng)，從而阻止羰-氨反應(yīng)的進(jìn)行，或?qū)︳?氨反應(yīng)的產(chǎn)物進(jìn)行還原。這證實(shí)羰基應(yīng)激對(duì)紅細(xì)胞的影響主要是作用在紅細(xì)胞膜上，這對(duì)加深理解和思考體內(nèi)紅細(xì)胞的迅速更新也有重要的科學(xué)價(jià)值。 三

4、、紅細(xì)胞膜羰基化蛋白的改變建立了MDA誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)羰基毒化模型。采用2，4-二硝基苯肼(DNPH)法測(cè)定了牛血清白蛋白(BSA)及紅細(xì)胞膜蛋白的羰基化程度，同時(shí)探討了GSH的去羰基毒化作用。結(jié)果表明：GSH具有顯著的去羰基毒化作用，并且在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴關(guān)系。進(jìn)一步定量地證實(shí)MDA對(duì)紅細(xì)胞膜蛋白具有損傷作用；GSH的去羰基毒化作用可能正是體內(nèi)抗應(yīng)激，抗血瘀及亞病態(tài)的極為重要的積極保護(hù)和恢復(fù)機(jī)制之一。 四、紅細(xì)胞膜流動(dòng)性的測(cè)定

5、采用1，6-二苯基-1，3，5-己三烯(DPH)熒光標(biāo)記法檢測(cè)了自制磷脂酰膽堿脂膜和紅細(xì)胞膜的流動(dòng)性。結(jié)果表明：MDA使得生物膜的熒光偏振度和微粘度下降，GSH具有抑制作用。這些數(shù)據(jù)從另外一個(gè)側(cè)面證實(shí)了MDA對(duì)脂質(zhì)和蛋白的損傷及GSH的去羰基毒化作用。 以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果從四個(gè)方面證實(shí)，MDA導(dǎo)致的羰基應(yīng)激可造成紅細(xì)胞損傷和血液粘度增加，而GSH可阻止羰基應(yīng)激或還原羰-氨反應(yīng)產(chǎn)物，且具有濃度依賴性。有力地支持了衰老學(xué)說中的羰基毒化理