環(huán)境友好前處理技術(shù)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中獸藥殘留的研究與應(yīng)用.pdf

1、動(dòng)物源性食品與人們的生活息息相關(guān),其質(zhì)量安全問(wèn)題更是受到各國(guó)政府和食品安全機(jī)構(gòu)的廣泛關(guān)注,而獸藥殘留是導(dǎo)致動(dòng)物源性食品安全性下降的重要因素之一。因此,獸藥殘留分析成為亟待解決的重要課題。
　　動(dòng)物源性食品中獸藥殘留的分析主要包括獸藥的提取和檢測(cè),當(dāng)代分析儀器已經(jīng)能夠滿足各類化合物的測(cè)定要求,因此制約動(dòng)物源性食品中獸藥殘留檢測(cè)的關(guān)鍵是樣品前處理技術(shù)。論文對(duì)現(xiàn)有動(dòng)物源性食品中獸藥的提取技術(shù)進(jìn)行了綜述,并期望探索新的環(huán)境友好前處理技術(shù)。

2、以分子熒光光譜法和平衡透析法分別詳細(xì)研究了二苯乙烯類激素與牛血清白蛋白(BSA)、二苯乙烯類激素與實(shí)際樣品之間的結(jié)合作用,闡明了待測(cè)藥物在實(shí)際樣品中的存在狀態(tài),為食品中獸藥殘留的提取提供了理論依據(jù)。結(jié)合乙醇-K2HPO4-水雙水相體系、有機(jī)水溶液提取法、弱酸水溶液提取法與高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)技術(shù),建立了檢測(cè)動(dòng)物源性食品中二苯乙烯類激素、喹諾酮類抗生素(QNs)和四環(huán)素類抗生素(TCs)的方法。
　　論文主要分為五部分:

3、r>　　第一部分:綜述了動(dòng)物源性食品的安全狀況及獸藥殘留的危害,概述了動(dòng)物源性食品獸藥殘留的檢測(cè)方法和常用的前處理技術(shù),闡明了本論文的研究意義和內(nèi)容。
　　第二部分:應(yīng)用分子熒光光譜法研究了二苯乙烯類激素(己烷雌酚、己烯雌酚和雙烯雌酚)與BSA的結(jié)合作用,進(jìn)一步利用平衡透析法研究了二苯乙烯類激素與實(shí)際牛奶樣品的結(jié)合率,同時(shí)詳細(xì)討論了蛋白質(zhì)對(duì)提取牛奶樣品中二苯乙烯類激素殘留的影響。結(jié)果表明,二苯乙烯類激素與牛奶樣品具有較強(qiáng)結(jié)合作用,

4、而體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇水溶液可引起蛋白質(zhì)緩慢變性、伸展,充分離解與其結(jié)合的二苯乙烯類激素,向上述體系中加入適量 K2HPO4鹽后形成雙水相體系,脂溶性的二苯乙烯類激素殘留可進(jìn)入雙水相體系上相,實(shí)現(xiàn)藥物殘留的均相高效萃取與基質(zhì)去除。由于體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇水溶液的極性較大,萃取液中的脂溶性雜質(zhì)比常用的疏水溶劑液液萃取體系中少,所以本實(shí)驗(yàn)無(wú)需后續(xù)凈化步驟,應(yīng)用高效液相色譜(HPLC)測(cè)定。實(shí)驗(yàn)提出的樣品前處理方法用于牛奶中三種二苯乙烯類

5、激素的快速測(cè)定,取得滿意結(jié)果,回收率為83.2%~93.8%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于4.5%,檢出限為11.7~20.7 ng·g-1,樣品前處理方法步驟簡(jiǎn)單,高效,經(jīng)濟(jì),綠色環(huán)保,為藥物檢測(cè)提供了一個(gè)新的有效方法。
　　第三部分:結(jié)合液相色譜檢測(cè)技術(shù),建立了一種環(huán)境友好型檢測(cè)牛肉、豬肉、魚肉中三種二苯乙烯類激素的方法。運(yùn)用平衡透析法研究了藥物與肉樣之間的強(qiáng)結(jié)合作用,同時(shí)運(yùn)用瑞利散射光譜和HPLC研究了蛋白質(zhì)對(duì)提取三種二苯乙烯類激素的影

6、響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,藥物與蛋白質(zhì)之間的強(qiáng)結(jié)合作用可以降低從肉樣中提取二苯乙烯類激素的提取率。以體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇水溶液作為提取試劑時(shí),肉樣中的蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生緩慢且完全的變性,釋放出與蛋白質(zhì)結(jié)合的二苯乙烯類激素藥物,進(jìn)而得到較高的提取率。由于80%的乙醇水溶液極性較大,提取液中的脂溶性雜質(zhì)很少,在提取液中加入少量的PSA(N-丙基乙二胺修飾的硅膠)粉末即可達(dá)到滿意的凈化效果,大大簡(jiǎn)化了樣品溶液的后續(xù)凈化步驟。實(shí)驗(yàn)提出的樣品前處理方法簡(jiǎn)單高

7、效,環(huán)境友好,通過(guò)減慢蛋白質(zhì)的變性速度,使與蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物充分釋放到提取液中,達(dá)到提高藥物提取率的效果。本法應(yīng)用于牛肉、豬肉、魚肉中二苯乙烯類激素的測(cè)定,結(jié)果令人滿意,回收率均在81.4%~98.1%之間,RSD值為1.3%~4.8%。
　　第四部分:建立了一種環(huán)境友好型、同時(shí)分離、檢測(cè)牛奶中六種喹諾酮類藥物(依諾沙星,諾氟沙星,環(huán)丙沙星,洛美沙星,恩諾沙星,加替沙星)的高效液相色譜分析法。方法采用反相Chromatorex C

8、18色譜柱,二極管陣列檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。實(shí)驗(yàn)表明,適當(dāng)濃度的檸檬酸和硫酸銨溶液作為提取液時(shí)可使牛奶中的蛋白質(zhì)發(fā)生緩慢而徹底的變性,釋放出與其結(jié)合的喹諾酮類藥物,從而提高了從牛奶中提取喹諾酮類藥物的提取效率。然后通過(guò)對(duì)提取液進(jìn)行加熱沉淀蛋白質(zhì)、加入PSA凈化,即可實(shí)現(xiàn)樣品的快速前處理。該方法用于牛奶中六種喹諾酮類抗生素殘留的測(cè)定,回收率均在82.0%~117.8%之間,方法檢出限為34.5~85.0 ng·g-1,實(shí)驗(yàn)提出的

9、樣品前處理方法可靠、快速、環(huán)保、易于操作。
　　第五部分:實(shí)驗(yàn)詳細(xì)探討了蛋白質(zhì)對(duì)于從牛奶中提取三種四環(huán)素類藥物(金霉素、美他環(huán)素和強(qiáng)力霉素)提取率的影響,并選擇合適的弱酸溶液作為提取試劑,同時(shí)用HPLC法考察了三種藥物在不同弱酸濃度下的提取率。結(jié)果表明,合適濃度的弱酸溶液可以破壞四環(huán)素類藥物與蛋白質(zhì)之間的強(qiáng)結(jié)合作用,使牛奶中的蛋白質(zhì)緩慢變性并充分釋放與其結(jié)合的四環(huán)素類藥物,從而提高了從牛奶中提取四環(huán)素類藥物的提取效率。加入PSA粉