動態(tài)監(jiān)測膿毒癥患者血清miRNA表達對膿毒癥診斷價值的實驗研究.pdf

1、目的:本實驗旨在應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)篩選并驗證可用于診斷、預(yù)測膿毒癥預(yù)后的血清miRNA,并觀察血清miRNA在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的動態(tài)變化及與疾病的關(guān)系。
　　方法:以2011年9月10日至2012年12月30日期間在中國人民解放軍總醫(yī)院呼吸重癥監(jiān)護病房、急診重癥監(jiān)護病房和外科重癥監(jiān)護病房的住院患者為研究對象,收集滿足膿毒癥兩項或兩項以上條件感染患者的血標本,共66例。按照28天疾病轉(zhuǎn)歸情況,分為生存患者33例,死亡患者3

2、3例,并以24名健康人血清作為對照。采集第1、3、5、7、10、14天的血清樣本,并記錄對應(yīng)時間的生命體征、CRP、PCT、血常規(guī)、血生化、凝血功能及動脈血氣分析結(jié)果。利用qRT-PCR驗證前期測序篩選出的差異表達miRNA分子,對有差異表達的miRNA進行ROC曲線分析,比較曲線下面積。最后將上述篩選出的miRNA和常用指標包括基礎(chǔ)疾病、WBC、CRP、APECHEⅡ評分和SOFA評分均納入二分類變量logistic回歸分析,篩選同膿

3、毒癥預(yù)后相關(guān)的因素。對最終篩選的miRNAs進行靶基因預(yù)測,探討其參與膿毒癥發(fā)病的機制。
　　結(jié)果:選取同膿毒癥相關(guān)的7種miRNA(miR-16,miR-122,miR-146a,miR-150,miR-193b*,miR-483-5p和miR-574-5p)進行qRT-PCR驗證。驗證后本研究的主要結(jié)果如下:
　　1)66例膿毒癥患者與24例健康對照組在各個觀測時間點的組間比較,miR-483-5p和miR-574-5p

4、差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05),miR-16、miR-122、miR-146a、miR-150和miR-193b*的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001);
　　2)66例膿毒癥患者中的33例生存組和33例死亡組比較,miR-193b*、miR-574-5p在各時間點上p值均小于0.001,miR-16在第1天(p=0.041)、miR-122在第1天(p=0.026)和第10天(p=0.040),miR-483-5p在第1天(

5、p=0.009)、第5天(p=0.014)第14天(p=0.042)差異有統(tǒng)計學(xué)意義,其余miRNAs在各時間點的組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05);
　　3)ROC曲線分析得到miR-146a在各個觀測時間點診斷膿毒癥的AUC最大(AUC>90％),敏感性和特異性都較高;
　　4)將生存組和死亡組存在差異表達的4種miRNA入組第1天的表達量水平同對應(yīng)時間點的SOFA評分、APACHEⅡ評分、WBC和CRP做預(yù)測病死

6、率的ROC受試曲線,結(jié)果顯示,miR-193b*的AUC最大為0.858(0.763,0.952),其次是miR-574-5p和miR-483-5p,其AUC分別是0.711(0.573,0.850)和0.681(0.545,0.817);
　　5)利用二分類變量logistic回歸分析評價膿毒癥的危險因子與保護因子,結(jié)果顯示年齡、SOFA評分,miR-122、miR-193b*、miR-483-5p和miR-574-5p在評估膿

7、毒癥預(yù)后方面有重要的價值(p<0.05),但只有miR-193b*進入最后的回歸方程,OR是0.769(95%CI,0.667-0.887),提示miR-193b*是膿毒癥預(yù)后獨立的危險因子;
　　6)利用miRanda和targetscan這兩個靶基因數(shù)據(jù)庫對miR-193b*進行靶基因預(yù)測,共預(yù)測得到18個在兩個數(shù)據(jù)庫中有交集的靶基因,并通過KEGG數(shù)據(jù)庫對靶基因進行通路注釋,其中7個靶基因可能作用于膿毒癥的相關(guān)通路,為下一步

8、的研究建立了良好的基礎(chǔ)。
　　結(jié)論:
　　1.證實了miR-16、miR-122、miR-146a、miR-150在膿毒癥病程中表達穩(wěn)定,可作為診斷膿毒癥的生物標記物,其中miR-146a的診斷效果最好;
　　2.MiR-193b*是一種可用于膿毒癥診斷的生物標記物,并可以用來評價膿毒癥的預(yù)后,是膿毒癥的獨立危險因子;
　　3.經(jīng)預(yù)測,miR-193b*可調(diào)控18個靶基因,其中7個靶基因可能作用于膿毒癥的相關(guān)通路