平菇多糖分離純化、結(jié)構(gòu)表征與修飾及抗氧化性的研究.pdf

1、平菇(Pleurotus ostreatus)又名白平菇、側(cè)耳，屬擔(dān)子菌亞門，層菌綱，傘菌目，口磨科，是廣泛栽培的食用菌之一。平菇子實(shí)體中含有大量碳水化合物，多糖是其主要活性物質(zhì)，具有免疫調(diào)節(jié)，抗氧化等功效。本論文主要對(duì)平菇多糖提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)平菇多糖的分離純化及各級(jí)分多糖的體外抗氧化活性進(jìn)行了研究，并對(duì)平菇多糖的結(jié)構(gòu)表征和修飾做了初步的探索，主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)平菇多糖提取工藝的優(yōu)化，主要采用了響應(yīng)曲面法優(yōu)化平菇

2、多糖水提工藝，均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化超聲波輔助提取工藝，正交試驗(yàn)優(yōu)化堿法輔助提取工藝，三種提取方法結(jié)果為:熱水浸提最佳工藝條件為料液比1∶44.6(g/mL)，提取溫度90℃，提取時(shí)間4.3h，多糖得率為3.25％;超聲波輔助提取最佳工藝條件為料液比1∶20（g/mL），提取時(shí)間為85min，提取溫度為75℃，超聲波功率為120W，平菇多糖得率為9.76％;堿法輔助提取最佳條件為，提取溫度為90℃，料液比為1∶45，堿液濃度0.5mol/L，提

3、取2.5h，平菇多糖的得率為9.54％。
　　(2)平菇多糖分離純化工藝的研究，對(duì)平菇粗多糖采用了Sevage法、三氯乙酸法、中性蛋白酶法和Sevage聯(lián)用中性蛋白酶法四種方法的脫蛋白，結(jié)果表明Sevage法7次操作后蛋白脫除率為96.59％，多糖保留率為46.15％;三氯乙酸法在9％濃度下蛋白脫除率為65.98％，多糖保留率為51.36％;中性蛋白酶1mg酶解3h，蛋白脫除率為82.81％，多糖保留率為90.25％; Sevag

4、e聯(lián)用中性蛋白酶法作用下蛋白脫除率為95.44％，多糖保留率為80.43％，綜合考慮，選用Sevage聯(lián)用中性蛋白酶法脫蛋白。多糖在脫蛋白后，經(jīng)DEAE-52離子交換柱層析和Sephadex G-100凝膠柱層析分離得到POP-Ⅰ-1，POP-Ⅱ-1，POP-Ⅲ-1和POP-Ⅲ-2四個(gè)不同級(jí)分的平菇純多糖。選取POP-Ⅰ-1，POP-Ⅱ-1兩個(gè)組分的多糖進(jìn)行純度鑒定，紫外光譜結(jié)果表明兩組分均不含核酸和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，純度較高。
　　

5、(3)平菇各級(jí)分多糖的體外抗氧化性研究，考察了平菇水提粗多糖、堿提粗多糖兩個(gè)粗多糖組分與POP-Ⅰ-1、POP-Ⅱ-1兩個(gè)純多糖組分對(duì)DPPH·、羥自由基、超氧陰離子自由基的清除效果和還原力的測定。四組分對(duì)DPPH·的最大清除效果依次為47.70％、41.9％、14.29％和11.22％;對(duì)羥自由基的最大清除率依次為100.00％、73.31％、8.41％和23.63％;對(duì)超氧陰離子自由基的最大清除率依次為20.21％、31.00％、1

6、7.23％和22.91％;最大還原力依次為0.430、0.464、0.059和0.188;同時(shí)平菇水提粗多糖對(duì)豬油和芝麻油的氧化也有著較好的抑制作用。
　　(4)平菇多糖結(jié)構(gòu)及修飾的初步研究，選取平菇純多糖POP-Ⅰ-1和POP-Ⅱ-1進(jìn)行試驗(yàn)，兩者的薄層層析、紅外光譜和核磁共振分析表明平菇多糖主要構(gòu)成單體是葡萄糖，同時(shí)含有α和β兩種糖苷鍵，以α糖苷鍵為主。兩組分分別進(jìn)行了硫酸化和羧甲基化，得到硫酸化多糖SPOP-Ⅰ-1和羧甲基化