小反芻獸疫病毒V蛋白拮抗干擾素介導的先天性免疫系統(tǒng)功能位點的確定.pdf

1、小反芻獸疫(Peste Des Petits Ruminants，PPR)是由小反芻獸疫病毒(Peste Des Petits RuminantsVirus，PPRV)感染引起的一種高感染性、高致死率疾病。PPRV感染嚴重損傷宿主動物靶器官，導致巨大的經(jīng)濟損失。目前對于PPRV的發(fā)病機制、感染損傷機制以及免疫抑制機制研究不多。本文利用熒光素酶檢測發(fā)現(xiàn)，過表達西藏毒株P(guān)PRV V蛋白能夠抑制干擾素的產(chǎn)生和干擾素的信號轉(zhuǎn)導。通過缺失突變技術(shù)

2、發(fā)現(xiàn)，V蛋白C端對于干擾素的產(chǎn)生起到關(guān)鍵作用。為探明V蛋白的C端抑制干擾素產(chǎn)生的分子機理，進一步采用PPRV V蛋白、V蛋白缺失和單位點突變體共沉淀RLRs通路中的MDA5、RIG-Ⅰ模式識別受體。結(jié)果表明，PPRV V蛋白能夠通過其C端的半胱氨酸殘基結(jié)合MDA5，但對于RIG-Ⅰ介導的IFN的產(chǎn)生沒有影響，同時利用熒光素酶檢測發(fā)現(xiàn)，V蛋白的C端可利用LGP2模式識別受體的協(xié)助，抑制RIG-Ⅰ介導的IFN的產(chǎn)生。實驗研究發(fā)現(xiàn)，PPRV

3、V蛋白能夠抑制IFN介導的信號轉(zhuǎn)導，利用V蛋白及其突變體，通過熒光素酶檢測、免疫共沉淀、pull-down、VSV-GFP感染復制等實驗手段，證實PPRV V蛋白的C端抑制STAT2介導的干擾素的信號轉(zhuǎn)導，而PPRV V蛋白的N端卻抑制STAT1介導的干擾素的信號轉(zhuǎn)導。深入研究還發(fā)現(xiàn)，PPRVⅤ蛋白的C端利用其Cys殘基和Trp殘基結(jié)合STAT2，進而改變STAT2的亞細胞分布;PPRV V蛋白的N端利用Y110位氨基酸殘基結(jié)合STAT