NKp30+ NK細胞參與Peg-IFn-α-2b治療慢性乙型肝炎中HBV病毒的清除.pdf

1、目前治療慢性乙型肝炎的藥物主要有三大類:短效的α-干擾素，長效聚乙二醇化的α-干擾素以及核苷或核苷酸類似物。但是幾種藥物治療后HBV e抗原的轉(zhuǎn)陰率不高，長效干擾素只有30％,而核苷類似物更低僅有20％。因此如何提高干擾素治療的有效率就顯得尤為重要。找到干擾素應答和不應答病人之間的差異的免疫學機制是解決這一問題的關鍵。
　　自然殺傷細胞在肝臟中占總淋巴細胞的30-50％長效干擾素可以通過直接或者間接的方式活化NK細胞，同時多個調(diào)控

2、NK細胞活化的受體對于活化NK細胞清除乙肝病毒有促進作用。
　　本課題的目的旨在探討NK細胞和長效干擾素應答之間的關系。我們選取了102例HBeAg陽性的慢性乙型肝炎患者。接受為期一年的長效干擾素治療，并且進行半年的隨訪。對干擾素治療前后病人外周血NK細胞進行表型和功能的鑒定，同時進行病毒學臨床指標的監(jiān)測，經(jīng)過統(tǒng)計分析和比較，我們得到以下研究結果:
　　1.CD56bright NK數(shù)量變化和治療應答狀況相關
　　我們

3、動態(tài)分析和比較干擾素應答和不應答病人之間NK細胞比例和絕對數(shù)量的差異，結果發(fā)現(xiàn)干擾素應答的病人在治療的3到12月期間，NK細胞的絕對數(shù)量顯著多于干擾素不應答的病人。和治療前相比不應答病人NK細胞絕對數(shù)量減少，應答病人則沒有變化。而且我們還發(fā)現(xiàn)治療過程中應答病人比不應答病人出現(xiàn)更高比例的NK細胞，主要出現(xiàn)在治療中的3月、6月和9月三個時間點，而在不應答病人中出現(xiàn)相反的趨勢，表現(xiàn)為3個月后開始的NK細胞比例下調(diào)，一直持續(xù)到治療結束。進一步分

4、析NK細胞兩個亞群在干擾素治療過程中的變化，我們發(fā)現(xiàn)CD56brightNK細胞的比例和絕對數(shù)在治療過程中均有顯著增加，而且在治療過程中應答病人CD56bright NK細胞的絕對數(shù)要顯著多于不應答病人。
　　2.在干擾素治療過程中，應答病人NKp30+NK細胞數(shù)量增加更為顯著
　　我們動態(tài)檢測了NK細胞的表型變化，我們發(fā)現(xiàn)自然殺傷受體NKp30的表達隨著干擾素的治療進程有非常顯著的增加，尤其是NKp30+ NK細胞數(shù)量在應

5、答病人中顯著多于不應答病人，這種趨勢從治療的第3個月一直能夠維持到第12個月，直至治療結束。但是NKp44，NKp46和NKG2D在應答和不應答病人中并沒有差異。
　　3.Peg-IFN-α-2b通過促進IL-15的產(chǎn)生間接增強NKp30+NK細胞的增殖能力
　　我們發(fā)現(xiàn)NKp30+NK細胞Ki67的表達水平在干擾素治療后要明顯高于治療前。但是體外實驗發(fā)現(xiàn)單獨Peg-IFN-α-2b刺激并不能上調(diào)NKp30的表達，經(jīng)細胞因子

6、篩查發(fā)現(xiàn)IL-15有此作用，通過檢測IL-15受體旺鏈，我們發(fā)現(xiàn)單核細胞上有高水平的IL-15受體的表達，而且應答病人單核細胞上IL-15受體的表達也顯著高于不應答病人。
　　4.Peg-IFN-α-2b治療能夠維持NKp30+NK細胞的抗病毒功能
　　為了進一步研究NK細胞的功能變化，我們檢測NK細胞的IFN-γ和CD107a表達水平，我們發(fā)現(xiàn)多功能IFN-γ+CD107+NK細胞比例在應答病人和不應答病人之間有差異。CD

7、107a+NK細胞比例在應答病人中也顯著高于不應答病人，提示多功能IFN-γ+CD107+NK細胞可能有利于慢性乙型肝炎病人對應干擾素的應答。為了進一步研究NKp30+NK的功能，我們用細胞因子IL-12刺激應答病人和不應答病人的外周血單個核細胞，我們發(fā)現(xiàn)應答病人在治療過程中的6到9月期間有更高比例的NKp30+IFN-γ+NK細胞。
　　5.應答病人在干擾素治療過程中產(chǎn)生更多表達CD62L的NKp30+NK細胞
　　我們檢

8、測兩個亞群NK細胞中NKp30+NK細胞表達CD62L的水平，發(fā)現(xiàn)治療結束后，應答病人和不應答病人相比CD56brightNKp30+NK細胞和CD56dimNKp30+NK細胞都有更高水平CD62L的表達提示CD62L+NK細胞是產(chǎn)生IFN-γ的關鍵NK細胞。
　　6.Peg-IFN-α-2b上調(diào)NKp30+NK細胞表面NKG2A的表達
　　共標檢測NK細胞表面NKp30和NKG2A發(fā)現(xiàn)不應答病人在治療過程中的第6月，9月

9、，12月有更高比例的NKp30和NKG2A雙陽性NK細胞，并持續(xù)到隨訪階段，與之相反的是，應答病人中有更多NKG2A-NKp30+ NK細胞，體外實驗證明兩群細胞有功能差異，前者功能較弱，后者功能較強。
　　綜上所述，我們的研究揭示PegqFN-α-2b對于NK表型和功能有調(diào)控作用，可能是通過作用于單核細胞，促進其分泌IL-15，進而提高NK細胞的增殖能力，NK細胞數(shù)量增加，活化性受體NKp30表達上升，NK細胞功能活化，介導對H